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缩写词和首字母缩写词

APEC 亚太经济合作体
BP 对虾杆状病毒
CCP 关键控制点
CV 变异系数
EDTA 乙烯二胺四乙酸
FAO 联合国粮食及农业组织
HACCP 危险分析关键控制点
IHHN 传染性皮下出血性坏死
LAN 局域网
NACA 亚太水产养殖中心网
NC 国家协调官
OIE 动物流行病国际署
PCR 聚合酶链式反应
PL 虾苗
PVC 聚氯乙烯
SEMERNAP 环境、天然资源和渔业部
SOPs 标准操作程序
SPF 无特定病原
SPR 抗特定病原
SPT 耐特定病原
TSV 托拉综合症病毒
UV 紫外
WSSV 白斑综合症病毒
YHV 黄头病毒

1 引言

病害已经成为拉丁美洲对虾养殖的一个主要限制因素。尤其是自从白斑病(由白斑综合症病毒WSSV引起)爆发以来,许多国家的对虾产量出现了显著的下降,养殖户在继续生产方面遇到了严重的困难。由此产生的经济损失及其影响正在对国家经济和较贫困人群带来严重的影响。例如,厄瓜多尔1999年12月的对虾出口量下降到了1985年以下的水平。为与这种状况的斗争提供援助被认为是非常适当和迫切需要的。这种援助将有助于保证对虾养殖的发展、通过贸易(包括本地和国际的)带来的国家性收入和养殖户以及其他服务提供者的生计。

在调查对虾病害和病原扩散的特点时,尤其是那些病毒性病原,有令人信服的证据表明大多数重要疾病的爆发与活虾(繁殖亲体、无节幼体和虾苗(PL))的转运相关。在以水产养殖为目的的活虾群体的国际性或地区性转运中持慎重的态度是重要的。这种防范甚至适用于已驯化的群体和在不同地点养殖的同一对虾品种。但是,应当允许采取了适当的隔离和筛检程序的转运。

在过去的几年内,主要通过在亚洲和拉丁美洲取得的经验,我们对控制对虾病,特别是白斑病毒综合症的途径和选择的了解已经有了改善。与虾病问题斗争的最终解决方法是在非胁迫性条件下,使用营养全面的干饲料在生物安全的池塘中养殖有保证的、驯化的无特定病原的对虾群体。这应当是对虾养殖业的最终目标。

在胁迫方面,虽然不可能控制天气,但我们确实有能力控制许多变化因子,例如池塘负载力、饲料投入和水交换。目前,干饲料看来是适当的,尽管在其质量上显然还有改善的余地。养殖者目前面临的最大的潜在可控制问题是养殖中与虾苗质量方面的不确定性和缺乏避免病原和其携带者进入的池塘环境生物安全性。

解决虾苗质量问题最简单的方法是从使用来自捕捞亲体的虾苗转向使用来自驯化群体的虾苗。但是,这种实践要求相当的研究努力和野外试验,它仍处于其初期阶段。至少,我们能够试图通过放养之前针对重要的病原对虾苗进行筛选来保证池塘的生物安全性。针对重要病原(主要是WSSV)的虾苗筛选程序已为众所知,但是,更多的培训、能力建设和孵化场及诊断中心的提高是必要的。

目前,还缺乏协调一致的孵化场生产技术标准。建立这种技术标准,使其标准化、得到验证和在国家和国际范围内被孵化场生产者所接受是必要的。

1999年11月,在菲律宾的宿雾市举行了一个粮农组织专家研讨会,包括5个拉丁美洲国家在内的14个国家的代表出席了研讨会。研讨会对若干控制虾病问题的策略进行了讨论并达成了一致和对以后的活动做出了建议。这些想法在2000年7月24-28日在墨西哥哈利斯科Puerto Vallarta举行的关于水产动物病原的跨界转移和水产养殖健康管理统一标准的最近的APEC/NACA/粮农组织/SEMARNAP专家研讨会上进行了进一步讨论。所形成的一个共识是这些策略应当被结合到以援助为目的的地区性技术合作项目中,建议参与项目实施的粮农组织成员国在项目建议书的制定过程中表示出对这些策略的赞同。

制定活体水生动物(亲体、无节幼体和对虾苗)安全跨界运输所需的检疫和健康认证的地区性技术指南和标准,并且在该地区内使其一致化被认为是及时和适当的。但是,做到这一点需要一定的时间,而且在建立适当的国家性能力之前,如何遵守这些指南和标准还会是一个问题。尽管如此,粮农组织为亚洲水生动物安全转运制定的健康管理方面的技术指南经验可以适时地应用和有助于拉丁美洲的工作(见粮农组织/NACA 2000,2001a)。包括职员和养虾户在内国家性机构的能力建设是重要的。应当使养殖户们了解可用于控制病害(尤其是WSSV)的选择和机会。建立良好的养殖场和孵化场管理准则和以足够的科学证据和野外数据对其加以证明也是适当和及时的。

考虑到以上几点,非常清楚的是帮助美洲国家应对当前的对虾病害形势的最及时和有效的方法是i)为虾苗质量的改善制定干预性措施;ii)养殖者和适当的国家机构中的能力建设;和iii)在该地区内建立全面的信息网络。厄瓜多尔政府向粮农组织提出了为厄瓜多尔与严重的虾病问题斗争提供技术援助的正式要求,在与美洲的对虾生产国进行商讨和达成一致后,粮农组织决定准备一个针对上述问题的地区性技术合作项目。

于2001年开始的这一项目,包含了伯利兹、巴西、哥斯达黎加、哥伦比亚、古巴、厄瓜多尔、萨尔瓦多、危地马拉、洪都拉斯、墨西哥、尼加拉瓜、巴拿马、秘鲁和委内瑞拉等14个国家的参与。每个国家的代表回答了关于其国家对虾成熟和孵化场实践的调查问卷。该问卷涉及了生产的若干个方面,注意力集中于对虾的成熟和孵化场的类型、规模、品种、管理、采用的理化处理和消毒程序;健康管理;生产和质量评估方法;运输方法和遇到的问题。

本文件提供的技术指南是由参与本项目的国家协调官(NCs)和专家编写和以参与国政府提供的信息为基础的。

2 海水对虾对全球水产养殖产量的贡献

2000年,全球报告的水产养殖总产量为4571万吨(mmt),其产值为564.7亿美元。超过一半的总产量来自于有鳍鱼类(2307万吨或总产量的50.4%),其余依次为软体动物(1073万吨或23.5%),水生植物(1013万吨或22.2%),甲壳动物(165万吨或3.6%),两栖动物和爬行动物(10.0271万吨或0.22%)和其它水生无脊椎动物(36965吨或0.08%。2000年,虽然甲壳动物(主要由对虾组成的大类)在重量上仅占全球总产量的3.6%,但在产值上它们构成了全球水产养殖总产量的16.6%。

2000年,全球水产养殖产量的一半多(54.9%)来自于海洋或沿海咸淡水,与此相对照的是占45.1%的产量来自淡水养殖。2000年,尽管咸淡水按重量仅提供了全球水产养殖总产量的4.6%,但按产值咸淡水贡献了总产量的15.7%。咸淡水中养殖的主要品种为高价值的甲壳动物和有鳍鱼类(分别为50.5%和42.7%),而软体动物和水生植物主宰了海水养殖(分别为46.1%和44.0%)。

在过去的若干年内,海水对虾持续左右甲壳动物的养殖,2000年对虾产量达到1087111吨(全球甲壳动物养殖产量的66%),而产值达到6880068900美元(总产值的73.4%)。水产养殖目前仅提供了略多于四分之一(26.1%)的全球对虾上市量。主要的养殖品种为斑节对虾(Penaeus monodon)、中国对虾(P.chinensis)和南美白对虾(P.(Litopenaeus)vannamei),这三个品种的产量占2000年全球对虾养殖产量的86%以上。

甲壳动物产量的增长继续显示出强劲的势头,重量较1999年增加了6.8%,增长速度略高于有鳍鱼类(6.7%)、软体动物(5.8%)和水生植物(6.1%)。虽然对虾产量的增长仍然显著,与在上世纪70年代(23%)和80年代(25%)观察到的两位数增长相比,过去10年内的增长速度已下降到较为适度的水平(平均5%)。

2.1 拉丁美洲海水对虾养殖产量趋势  

2.2 拉丁美洲的对虾养殖:健康问题

3 对有效的孵化场生产的要求

为了给对虾孵化场管理提供实用和有效的技术指导,首先需要对有效的孵化场生产系统的要求进行评估。这些包括基本设施的存在、标准操作程序的制定(SOPs)(包括危险分析关键控制点(HACCP)分析)、生物安全性的维护、提供足够量的清洁水、化学药品的负责任使用和通过实验室的检验保证群体的健康状况。这些组成部分的许多方面将在本文稍后的章节中进行更加详细的讨论。

3.1 基础设施

孵化场必须是合理设计的和拥有足够的基本设施,因为这对于所生产虾苗的数量和质量有重要的影响。

对虾孵化场应当由几个单元组成,每个单元拥有适当的基本设施

良好的孵化场设计应当包括不同生产设施物理上的分离或隔离和有效的周边安全

为了把引进新的动物过程中感染现有繁殖群体的可能性最小化,应当有一个用于新繁殖群体的隔离检疫单元。

3.2 水质和水处理

水处理系统的设计应当能够提供高质量的源于海洋的海水

水分配系统的设计应当考虑水被分配到的各个区域所要求的生物安全牲的水平

所有从设施中排出的水都应当不带有病原

3.3 生物安全性

必须达到良好的生物安全性,因为它对于成功地生产健康虾苗是最为重要的

3.4 标准操作程序(SOPs)

每个孵化场应当制定它自身的一套标准操作程序(SOPs)

所有的工人应当签署一份文件指出他们己经阅读和理解了SOPs,而且他们将遵守所有的要求

关于生物安全性维护的培训应当是孵化场生产过程的一个重要组成部分

应当确定孵化场每个区域所带来的生物安全性风险

3.5 危险分析关键控制点(HACCP)方法

危险分析关键控制点(HACCP)方法可以使生物安全性规定的制定和实施变得更加容易

HACCP也应当被应用于对虾生产,并以降低或防止病害危险为特别重点

应当为孵化场设施建立一个详细描述所有操作和对虾及幼体在整个生产系统中运动的流程图

必须为每个区域确定关键控制点(CCPs)

孵化场的工人必须被限制在他们特定的工作区域内

SOPs应当解决由于职责要求他们通过孵化场内具有不同生物安全性分类级别的区域的人员导致的危险

在进入和离开生产单元时,所有人员都必须采取适当的卫生防范措施

必须对交通工具(人员或对虾运输车辆)给予特别的关注,因为这些交通工具在到达之前可能到过其他的孵化场或对虾养殖场

潜在疾病携带者进入到孵化场内必须得到控制

3.6 孵化场生产过程中化学药品的使用

孵化场生产过程中必须负责任地使用化学药品

表1.本文中提到的化学制品及其使用概要

孵化场的用途

化学药品

建议浓度(有效成分的份额)

流入海水的消毒

次氯酸钠[2]

20 ppm、不少于30分钟(或10 ppm不少于30分钟)

用于流入海水中重金属

的螯合作用

乙二胺四乙酸

依据海水中重金属的浓度

排放海水的消毒

次氯酸钠

20 ppm、不少于60分钟

确定水中氯的存在

正甲苯胺

5毫升水样中加入3滴[3]

水处理中氯的中和

硫代硫酸钠

每1ppm残留氯用1 ppm

繁殖亲体池水和孵化池水中

重金属的螯合作用

乙二胺四乙酸

必须根据场所内重金属的负载来确定,上限为20ppm,或二者均为

20-40 ppm

在繁殖亲体进入隔离检疫

时的消毒

聚乙烯吡咯烷酮碘剂福尔马林

20 ppm

50-100 ppm

繁殖亲体产卵后的消毒

聚乙烯吡咯烷酮碘剂

20ppm(浸泡)15秒钟

虾卵的洗涤和消毒

聚乙烯吡咯烷酮碘剂或福尔马林和氟乐灵

50-100 ppm   浸泡1-3分钟(或10-60秒)

100  ppm浸泡30秒

0.05-0.1 ppm(减少真菌感染)

丢弃的幼体的处理

次氯酸钠

20 ppm

清除寄生在虾苗体表的污物

福尔马林

充分曝气条件下,20-30 ppm浸泡小时

虾苗的应激试验

福尔马林[4]

30分钟

丰年虫卵的去膜

烧碱(NaOH)和氯溶液[5]

4毫升中40克(8-10%的活性成分)

丰年虫幼体的消毒

次氯酸钠溶液或T-氯胺或两者兼用

20 ppm

60 ppm浸泡3分钟

产卵和孵化池池水处理

氯乐灵

0.05-0.1 ppm

足浴

次氯酸钠(钙)溶液

>50 ppm(或>100 ppm)

设备消毒(容器、水管、网具等)

次氯酸钠或盐酸

20 ppm(或30 ppm)

10%溶液

手消毒

聚乙烯吡咯烷酮碘剂或、

酒精

20 ppm

70%

用于繁殖亲体的产卵、虾卵孵化、幼体和虾苗的培育和丰年虫卵孵化的水池的清洗和消毒

次氯酸钠和/或盐酸[6]

30 ppm(或20-30 ppm)

10%溶液(pH 2-3)

新生产周期开始前,对前期清洗和消毒过的水池进行消毒

盐酸

10%溶液

 

 

藻类培养池的消毒

次氯酸钠随后用盐酸

10 ppm

10%溶液

沙滤器的消毒

次氯酸钠或盐酸

20 ppm

10%溶液(pH 2-3)

筒式过滤器的消毒

次氯酸钠或盐酸

10 ppm

10%溶液(pH 2-3)浸泡1小时

饲料准备设备(刀具、工作台、搅拌器、颗粒机等)的洗涤

聚乙烯吡咯烷酮碘剂

20 ppm

 

3.7 健康评价

经常性的健康评价应当是良好的孵化场管理的组成部分

表2.适用于对虾孵化场系统的诊断级别描述

一级 对于动物和环境的观察。根据粗略的特征进行检查。
二级 使用光学显微镜和压片标本进行更详细的检查,可以采用或不采用染色和基本细菌学方法。
三级 采用更加复杂的方法,例如分子生物学技术和免疫诊断方法(如PCR和点渍法等)。

表3.对虾孵化场内一级、二级、三级诊断技术的使用

一级 检查繁殖亲体的总体健康状况,性别确定,确定性别发育的阶段,确定蜕皮的阶段,清除生病和垂死的个体。
通过趋光反应选择幼体,根据对粪便条、幼体活动、虾苗的活动和行为的观察来确定蚤状幼体/康虾幼体的投饲,应激试验。
二级 通过显微镜检查虾卵的质量。正常或垂死动物的细菌群落的检测。
无节幼体质量的显微检查。幼体状况的虾苗质量的常规显微检查。检查育苗水体和幼体的细菌群落。
三级 采用点渍法或PCR对繁殖亲体进行筛检。
采用点渍法或PCR对幼体或虾苗进行筛检。

4 产卵前过程

4.1 繁殖亲体的选择

为了成功地完成孵化场的生产,必须选择不带有严重病原的健康繁殖亲体

在使用家化对虾时,获得足够的关于群体的来源和它们以往表现的背景资料是必需的

4.2 繁殖亲体隔离检疫的程序

在到达孵化场之时,潜在的繁殖亲体应当被控制在隔离状态直至它们的疾病状况被确定

隔离检疫单元的结构应当使对虾在健康状况变得清楚时从“肮脏”区域被搬运到“清洁”区域。

在明确了解繁殖亲体的健康状况之前,它们不应被从隔离设施中释放出来

必须根据孵化场的具体需要来确定实验室设施和相关的专业技术人员

4.3 环境适应

通过了最初的隔离检测的对虾必须在成熟设施内适应新的环境

环境适应设施必须有足够的水池空间来容纳将要被引入成熟设施的对虾

在被放养到成熟池之前,繁殖亲体应当度过至少7天(和可长达数周)的适应期

4.4 成 熟

成熟建筑物必须足够大,以容纳足够的成熟池和孵化场所需的辅助设施

必须对成熟间的条件采取严密的控制

饲料准备区域应当与成熟间相邻;但与成熟反隔开

成熟池必须每天虹吸和定期清洗

在检查每个水池前,必须对用于捕捞成熟雌虾的设备进行洗涤

在自然交配中,应当保持最佳的群体密度

应当采用最适的雄雌放养比例

4.5 产 卵

应当使用隔开的产卵间

只要可能,产卵应当单个地进行

根据采用的产卵类型(单个或集中);产卵池的大小可以在300升至5-8吨的范围内变化

产卵系统应当拥有尽可能好的水质

作为一条普遍原则,应当只在必要的时候搬运繁殖亲体,以避免对虾过度的应激反应

抱卵雌虾的收集应当在黄昏或傍晚进行

应当对怀卵量、产卵率(每只雌虾产卵的数量)和雌虾保持在成熟池的时间进行监测

应当进行虾卵和精子的计数以确定优质卵的产量和受精

作为指导,每只体重在30-35克的雌虾产卵数量应在100 000-140 000粒卵的范围内,体重在40-45克的雌虾的产卵数量应在150 000 to 200 000粒卵的范围内。
为了保证良好的受精,应当采用高倍光学显微镜对精液进行观察和经常地对精子定量计数。

应当采用适当的虾卵收集系统

产卵可以是集中的,每个产卵池放两只或更多的雌虾,或采用单个的方式。在任何情况下,需要有适当的系统来收集虾卵和排除繁殖亲虾的粪便和卵巢组织(例如,使用网目为300-500 μ m预滤器)。
 
虾卵应当被收集到一个有孔径小于100 μm的、多数为水下网眼的容器,从而使虾卵在不受损伤的情况下被保留住。一旦被收集,应当用足够的处理过的海水对虾卵进行洗涤,然后用聚乙烯吡咯烷酮碘剂进行消毒(50-100 ppm,10-60秒钟),最后在另外的容器内用足够的清洁海水漂洗。

应当对受精和孵化率进行监测

在集卵后,虾卵被转移到孵化单元内的孵化池中。应当对所收集的虾卵取样检查来确定受精率和进行计数以便估计孵化率。受精率应当至少在50%,而更通常的是高于75%。一旦受精率低于50%,应当考虑放弃整批卵和开始调查以确定问题的原因。

4.6 孵 化

孵化应当在隔离和清洁的场所进行

孵化池(300-1000升)通常具有明显的锥形底部,允许良好的水循环和曝气及方便的收获。孵化池大小的变化范围从数十升到1吨,最多可投放400万粒卵/吨。要取得最佳的孵化效果,水质应当保持在29-32℃的水温和32-35 PPt的盐度下。出于与产卵时相同的目的,通常向孵化池水中添加乙二胺四乙酸(最大浓度为20 ppm)和氟乐灵(0.055-0.1 ppm)。
 
孵化池中需提供充足的曝气以保持虾卵在悬浮状态运动。幼体应当在大约放卵8小时后出现。在这之后(通常12-15小时后),停止曝气来收获幼体。这时,需在孵化池上盖上一个在中央剪出一个小洞的黑色盖子,在洞口上方悬挂一个灯泡。这将使得健康的幼体能够在20-30分钟的时间内集中到洞口的下方,然后用桶或虹吸将幼体收集到另外一个桶或收集容器内,幼体在这个容器内被清洗和消毒。接着,它们被保持在带有曝气的分开的池子或桶内,或者被直接送到幼体培育设施。然后,将保留在孵化池中未孵化的虾卵和体弱的幼体丢弃和对孵化池进行洗涤和消毒。产卵池和孵化池要每天用次氯酸钙(或钠)溶液(30 ppm 的活性成分)洗涤,在重新加水之前用充足的处理过的水进行冲洗。

4.7 繁殖亲体的健康筛检

除了普通的健康筛检外,应当针对WSSV,IHHN,TSV和YHV对被选择用于成熟培育的繁殖亲体进行筛检

当繁殖亲体的数量较大时,可以从不同的繁殖亲虾组中取出10个个体按批进行检测。每1000只一组的繁殖亲虾应至少取样150只,然后分成每10只一组进行分析。在进行遗传项目的选育时,应当进行更加严格的疾病筛检以确保不含病原。虽然在繁殖亲虾到达隔离场所时就应当进行PCR检测,在产卵后进行额外的PCR检测(至少针对WSSV)是值得的。这是因为有迹象表明在隔离期PCR检测WSSV为阴性的繁殖亲虾在经历了像产卵这样的应激过程后进行析检测的结果有可能为阳性。

4.8 繁殖亲体的营养

优质的饲料和良好的投饲方式应当是成熟程序的基本组成

繁殖亲虾的良好饲料和投饲方式是优质幼体生产的关键因子。应当按虾池中生物量的比例确定适当的饲料投喂量。总体上说,投饲率至多应当达到繁殖亲虾生物量的20-30%(按湿重计或使用新鲜或冰冻饲料时)。在使用干饲料时,投饲率会低一些。饲料投喂的确切数量应当经常地按每个虾池的消耗率进行调整。应当持续投饲直至每次投饲1-2小时后仍有少量未被吃掉的饲料残留在虾池内。 投喂的饲料应当是平衡的,集中使用富含维生素、矿物质、色素和脂肪酸(例如20:5n3和 22:6n3)的饲料,这些是生产虾卵必需的。

必须避免饲料准备过程中的交叉感染

饲料的准备应当按照良好的卫生标准进行。应当保持器具(刀具、工作台、搅拌器和颗粒机等)的清洁,在使用前用聚乙烯吡咯烷酮碘剂溶液(20 ppm)洗涤和用清洁水冲洗。

鲜饲料应当确实新鲜和被证实不带有重要的病毒或进行过消毒

在使用诸如鱿鱼、多毛环节动物、丰年虫、磷虾、贻贝、牡蛎和蛤类这样的新鲜饲料时,必须努力确保原料尽可能地新鲜。为了保证新鲜饲料不是对生物安全性的一种威胁,在购买时应当要求提供声明通过PCR分析显示不带有TSV、WSSV和YHV病毒的证书。作为替代选择,可以对饲料进行消毒或巴氏法灭菌(推荐)来灭活任何病毒,只要这一过程不影响饲料的可接受性和营养质量。理想地,不同类型的冰冻饲料应当储存在分开的冰柜内。

新鲜饲料应当被切成适合于摄取的大小:

需要将新鲜饲料剁成适合繁殖亲虾摄取的大小,并在投饲前用净水冲洗和称重。通常在白天和夜间,每隔3-4小时投饲一次。

应当对人工饲料增添营养添加剂

如果有意用干的或湿颗粒饲料来补充新鲜饲料,应当对人工饲料添加诸如维生素C、维生素E、免疫增强剂、虾青素、类胡罗卜素和多不饱和脂肪酸等添加剂。数家商业性公司生产用于补充成熟中使用的鲜饲料的人工饲料,虽然尚无一种可用作完全的替代。干或湿饲料也可以经济的方式,使用常规的对虾饲料磨成的粉和与上述的各种添加剂相混合,加上诸如藻酸盐和明胶这样的粘合剂,在常温下现场挤压而成。如何选择适当的饲料取决于成熟设施的具体要求。
 

干饲料应当与新鲜饲料分开投喂,每次采用较低的投饲率,每天投饲2-3次(每天最多为对虾生物量的2-3%),以保证饲料被完全吃掉

家化的南美白对虾比它们的野生个体或斑节对虾有优势,因为它们是用颗粒饲料培育的,因而更加习惯于颗粒饲料。事实证明,野生繁殖亲虾往往不情愿摄食干饲料,必须要在一定的时期内使其逐渐地适应于干饲料。就繁殖亲虾所有的管理实践而言,应当尽可能减少所作的改变,以限制动物的应激反应。对于投饲形式、饲料种类、数量和时间的任何变化应当被尽可能地减少。因此,应当一直保持所有饲料成分的原料或使用种类的稳定。

 

5 产卵后过程

产卵后过程包括设施的维护、水质管理、亲虾的处置、幼体的清洗、选择、暂养和运输;虾苗的培育、维护、健康管理、状况的评估、放养的选择和风险评价、运输和转移;文件证据的提供和记录档案的保存。

5.1 设施的维护

为了实现优质幼体的稳定生产,必须将生产设施维持在最佳状态下

必须对设施进行维护,从而为对虾亲虾、幼体和虾苗的生长、成活和健康提供最优化的条件,和使疾病暴发的危险最小化。为了有助于这些目的,孵化场的管理部门应当制定一套规定作为标准化操作程序(SOPs)的一部分和始终被所有的员工严格遵守。孵化场的标准操作程序应当包括每个养殖周期(幼体培育)后或至少每3-4个月一次的清洁性干池程序,每次清洁后干池的最少时间为7天。这有助于阻止病原从一个生产周期向下一个生产周期的传播。

应当对所有的设备进行经常性地彻底清洗,每次使用后进行清洗和消毒和在新的生产周期再次开始之前进行清洗和消毒

用于亲虾产卵、虾卵孵化和容纳幼体和虾苗的池子每次使用后应当彻底清洗。用于清洗和消毒的程序基本上与所有的池子和设备相同。它包括用干净水进行擦洗和清洁剂清除所有的污垢和残渣,用次氯酸盐溶液(20-30 ppm的活性成分)和/或10%的盐酸[8]溶液(pH 2-3)消毒,用足量的净水漂洗以去除残留的氯和/或酸,其后干燥。池壁也可用盐酸向下擦洗,室外虾池和小虾池可以通过阳光干燥消毒。

应当对以下要点给予考虑:
·应当在每个生产周期结束时对虾池进行清洗和消毒。
·应当对所有的孵化场设备进行经常性的清洗和消毒。
·涂有环氧树脂的水泥池或覆盖了塑膜的虾池比裸露的水泥池更加容易清洗和维护。
·从幼体培育池中收获幼体后,应当对培育池和所有的设备进行消毒。类似地,一旦车间内的所有池子都已收获,应当对车间自身及其所有设备进行消毒。
·在池子注水至最高水位后,加入次氯酸盐溶液达到至少含20-30 ppm的活性成分的浓度,48小时后,池子可以被排干和应当保持其干燥至下一个生产周期开始。
 
·车间内使用的所有设备和工具(过滤器、软管、大口杯、水和气管等)在首先用10%的盐酸洗涤后,可放置在一个含有次氯酸盐溶液的池子内。
·在3-4个月的正常运转周期后,应当对亲虾成熟池和所有相关的设备进行清洗和消毒。
·应当每月(或在干池过程中)用从中央池泵出的相同氯浓度的溶液和/或10%的盐酸溶液对水管、气管和气石等进行清洗。
·对所有孵化场建筑(地面和墙壁)进行周期性的(建议每生产周期一次)消毒。
·在两个生产周期之间,应当对所有其它设备进行彻底消毒。
·在新生产周期的放养之前,应当再次用洗涤剂对池子进行洗涤,用净水漂洗,用10%的盐酸进行擦洗和在注水之前再次用处理过的水漂洗。
·可能需要按设施的具体需要对消毒程序进行调整。
·在处理用于消毒的化学药品时,应当采取适当的安全措施。关于化学药品的使用和储存、穿戴保护性的用具、服装等应当被包括在孵化场标准操作程序(SOPs)内。
 
OIE(2003)也提供了用于孵化场各种项目消毒的推荐产品、浓度和频率。

5.2 水质管理

孵化场设施应当允许对进水的适当清洁和消毒

进水在被分配到不同的工作区域(孵化、藻类培养、丰年虫培育等)之前,应当通过氯处理和过虑进行清洁和消毒。分配的设计应当避免交叉感染的危险。水、气分配系统的设计应当允许通过系统来泵送消毒溶液和在排水时允许完全干燥。

理想地,成熟池和幼体培育设施应当被建造在海水供应比较有利的位置

但是,有可能使用从其它地点引入的海水或用适当的过滤和消毒技术处理过的并非最理想的海水。从总体看,封闭的再循环系统比开放水系统具有更好的生物安全性,但是要求额外的生物和机械过滤和消毒来维持最佳的水质。

应当使用“低沙滩井”进行初级水过滤

天然海水从大海进入孵化场时最常见的过滤系统多采用“低沙滩井”。它由一系列的过滤通道、井点、井和末梢组成,这些结构使海水在进入孵化场前得到初步过滤。它们还限制了污着生物、病原携带者、赤潮和一些病原的进入,而直接取水系统则做不到。

带有大量沉淀的海水应当通过沉淀池以除去悬浮固体物质

在蓄水池每天可以加注两次时,要求最低蓄水容量达到总容量的50%。

应当对进水消毒以消灭所有残留的病原和通过螯合作用去除存在的任何重金属

 
在最初的过滤和沉淀后,应当用次氯酸钙(纳)(10 ppm活性成分,不少于30分钟)和/或臭氧、或紫外光对进水消毒。经过氯处理后,在使用前必须用正甲苯胺(5毫升水样中加3滴)对蓄水池内的水进行检查,以确保水中没有氯残留(显示为黄色)。必须提供一张(块)由负责水质处理人员签名和说明水处理的日期和时间及这些检测结果的图表或白板。一旦氯气已经消散或用硫代硫酸钠中和(每1 ppm氯残留用1 ppm),可以用乙二胺四乙酸螯合水中存在的任何重金属(数量取决于重金属的浓度和效用)。

应当在水进入生产单元之前进行水温的调节

可能需要一套通常位于蓄水池和单产单元之间的锅炉和热交换系统,以在所要求的范围(根据区域和阶段通常在28-32℃,见表4)内调节水温。
 
蓄水池后的水过滤系统应当由沙虑器、活性碳和其它过滤元件,如筒式滤器或滤膜式过滤器组成,以用于需要细滤的用水。

必须对沙滤器进行适当的维护

必须用足够的时间每天将沙滤器反冲至少两次(或按进水中悬浮固体颗粒含量的要求确定),以保证滤器的清洁。
 
如果能够打开滤器检查通道和进行彻底的反冲是有益的。在每个生产周期开始时,必须用事先用含20 ppm活性成分的次氯酸钙溶液或10%的盐酸溶液(pH2-3)冲洗过的洁净沙子来替换原来的沙子。活性碳在每个育苗周期内至少被替换一次以保持其有效性。

筒式过滤器必须每天调换

在使用筒式过滤器时,必须有两套滤芯,这两套滤芯应当每天调换。用过的过滤器应当在含10 ppm活性成分的次氯酸钙(钠)溶液或10%的盐酸溶液中洗涤和消毒1小时。有些过滤器材料对盐酸敏感,在使用这种消毒剂时必须特别小心。然后用足量处理过的水漂洗过滤器和将它浸泡在含有10 ppm的硫代硫酸钠溶液的容器中,以中和氯气(如有使用)。根据海水中悬浮固体物质的含量,每个育苗周期需要有两套或更多的过滤器。
 
根据海水用途建议的最终过虑规格见表4。
 

表4.为孵化场不同需要推荐的水过滤标准和不温

水用途

过滤规格

(μm)

温度(℃)

成熟

28-29

孵化

5

28-32

产卵和孵化

0.5-1.0

29-32

藻类培养(室内/纯种)

0.5

18-24


如果使用再循环系统,应当使用额外的生物过滤

为了防止孵化场不同区域间的交叉感染,应当在每个需要的区域使用分开的再循环系统。水再循环系统是亲虾成熟效率最高的系统,因为它减少了水交换的需要和残留水的排放。再循环系统有助于维持水中稳定的理化因子,也有助于浓缩成熟过程中的交配激素,以及提供更好的生物安全性。

如果孵化场的任何区域需要海水的再循环,需要有额外的生物过虑来除去溶解的有机物质。有许多种类的生物滤器,所有种类都结合了生物元素(反硝化细菌),这种生物元素必须在使用前培养或被“引 入”(把额外的生物原料添加到过滤器中),这样,其效果在整个周期的所有阶段被最优化。它们也需要周期性的清洁,但要以不杀死其有益细菌栖息者的方式进行。

产卵池、孵化池和纯藻培养设施的用水必须具有相同的质量

产卵池、孵化池和纯藻培养设施应当得到质量相同和以与成熟和幼体培育单元用水相同的方式处理的水(例如增加紫外光消毒和过滤到0.5或1μm)。此外,针对孵化和产卵,通常需要添加20-40 ppm的乙二胺四乙酸以确保重金属被螯合和无法起作用,0.05-0.1ppm的氟乐灵常常被用于防止真菌。
 
水分配系统应当设计得使孵化场的每个区域都能分开消毒
 
从蓄水孵化场各个区域的不分配系统应当设计得使每个区域能够在不威胁其他区域的情况下进行消毒。这样,可以在适合于每个区域的时间进行常规消毒和避免不同区域间的交叉感染。不同部分的温度和盐度可能会有所不同,良好设计的分配系统将会是有益的。此外,每个区域有特殊的过滤要求,这可以在使用点之前被安排,以适合于孵化场的每个区域。应当确定水泵、管道和过滤设施的尺寸,因而能够维持预期的最大水交换率。以确保始终能够达到最佳的条件。

5.3 繁殖亲体的消毒

被从产卵池中移出的使用过的雌虾在被放回原虾池前,应当在聚乙烯吡咯烷酮碘剂溶液中浸泡(20 ppm,15秒)。

5.4 无节幼体的冲洗

收获的IV期幼体可以用氟乐灵(0.05-0.1 ppm)进行浸浴处理,以防止真菌的感染,然后用过滤和消毒过的水彻底清洗和在聚乙烯吡咯烷酮碘剂(50-100 ppm,1-3分钟)或T-氯胺溶液(60 ppm,1分钟)中浸泡,随后用清洁的海水进一步清洗。

也有介绍使用福尔马林和聚乙烯吡咯烷酮碘剂的其它洗涤步骤。Chen等(1992)和 Brock和 Main(1994)记述了将幼体在福尔马林(300 ppm)和碘液(100 ppm)浸泡30秒钟,然后在放养之前用过滤消毒过的海水漂洗3分钟。这在除去残骸和象细菌和原生动物这样的生物方面可能是有效的,还可以把病毒病传播的可能降低到最低限度。

5.5 无节幼体的选择

应当用通过光线吸引它们到水面的方法来收获幼体

因为幼体显示出很强的绝对趋光性,可以用一盏灯把它们吸引到水面来,以收获健康的幼体。那些停留在池底的幼体则被抛弃,以减少虚弱和畸形幼体的比例。收获后,要计数优质幼体的数量以获得孵化率。对于上等的批次而言,孵化率应当高于70%。如果碰到了较低的孵化率,需要做出决定是否应当抛弃整批的幼体,并开始寻找问题原因的调查。

应当对幼体的活力和颜色进行评估和估计畸形的百分率

通常认为低于5%的畸形率是可以接受的。使用绝对趋光性程度对幼体的状况进行评估。进行这种检测时,幼体的样品被放入一个紧靠光源的半透明容器内,并对幼体的移动进行观察。如果95%或更多的幼体迅速地向亮光移动,这些幼体则是优良的;如果70%或更多的幼体作出了反应,幼体的质量为中等;如果不到70%的幼体向亮光移动,幼体的质量差。根据每个孵化场的选择标准,质量差的批次可以被放弃。

5.6 无节幼体的暂养

必须将被收获的幼体暂养在最佳条件下直至被放养

收获的幼体可以被暂养在20 000-40 000/升的密度下,其间提供连续的光照、清洁的水和曝气直至准备好在育苗池中放养。与虾卵相同,可以用氟乐灵对幼体(IV期)处理和/或进行消毒。必须每天用次氯酸钙(钠)溶液(30 ppm活性成分)洗涤用于收获幼体的设备和器具,以防止对后面批次的污染。

5.7 幼体的运输

根据到达孵化场的距离或时间,应当以15000-30000 只/升的密度对幼体进行运输
通常采用装有10-15升水和充入纯氧的双层塑料袋进行运输。塑料袋被装在纸板和/或泡沫塑料箱内,尽管有时也使用塑料桶或塑料水槽。根据到达接收孵化场的运输时间和距离,需把包装和运输的温度从28-30℃下调到18-25℃(有时完全不需要)。盐度需维持在32-35 ppt。在到达购买的孵化场时,应当再次对幼体进行消毒。

只要可能,在进入育苗设施前,应当首先对运输车辆进行消毒。幼体拆箱后,必须将所有包装材料焚毁。
 

5.8 幼体培育和维护

幼体培育应当尽可能地生产优质和高度健康的虾苗

在许多情形下,孵化场和养殖场形成了独立的经济单位,幼体的质量常常因为经济的原因被牺牲。但是,现实中最经济的策略是生产能快速生产和不带病的虾苗,这种虾苗在养成设施中能够获得较高的成活率和生长速度。为了达到这一目的,应当为了最佳的效率、清洁和生产力而设计幼体培育涉及到的所有区域。

应当对进入幼体培育区域给予限制

进入幼体培育区域的应当仅限于那些在这些区域工作的人员。应当在孵化场每个车间进口处放置含有消毒液(例如>50 ppm活性成分的次氯酸钙或次氯酸钠溶液)的卫生垫或足浴器具。必须按需要对消毒液进行更换。在幼体培育车间的每个 入口处,应当有装有聚乙烯吡咯烷酮碘剂(20 ppm)和/或70%酒精的容器,所有人员在进入或离开车间时都必须用消毒液洗手。

每个车间都应当有常规操作所需的完备的器具

每个车间都应当有常规操作所需的完备的器具(过滤器、滤网、桶等)。应当提供一个含有消毒液(20 ppm活性成分的次氯酸盐溶液)的容器(500-600升)用于软管、桶等的消毒。每天结束时,可以将经常使用的设备放置在这个消毒池内,第二天再次使用前需进行漂洗。应当每天或按要求的时间对池中的消毒液进行更换。

所有的器具和设备应当只用于自车间,不应离开该车间或用于其他地方

此外,应当把用于各个池子的大口杯和网具等保存在装有次氯酸钠溶液 (20 ppm活性成分)的桶内,而且只用于那一个池子,以防止同一单元内不同池子间的交叉感染。

应当定期地检查幼体和虾苗的质量

应当用一次性的塑料容器(纸杯或300毫升的塑料大口杯)对定期检查的幼体或虾苗取样,这些容器在使用一次后就要被处理掉。在每天的检查完成后,这些幼体或虾苗应当被丢弃在一个含有次氯酸钠溶液(20 ppm活性成分)或其它合适的消毒剂的塑料容器内。决不应把每天检查中使用的幼体或虾苗放回幼体培育车间或幼体培育池。

幼体培育设施应当包含一个或更多的锥形式V形幼体培育池

幼体培育设施基本上由一个或更多单元的锥形或V形幼体培育池组成(培育池有时被分成两个阶段:一种从无节幼体到4-5天的虾苗,而较大和平底的池子或水槽用于虾苗或幼虾培育。辅助性设施(在其他章节讨论得更为详细)包括蓄水池、水处理、加热和分配系统;曝气系统;用于藻类和丰年虫(和其它)活饵料的生产设施;用于健康检查、细菌学和饲料准备的实验室;办公室和用于虾苗包装和运输的区域。

5.9 幼体的营养和投饲管理

应当保持饲料准备中的高标准

所有的饲料准备,特别是活饵料(藻类、丰年虫及其它)属于关键控制点,因为饲料可能会因为不当的处置而遭受污染。应当从病原危险的角度去考虑所有活的、新鲜或冰冻食物的来源。应当对饲料种类的来源、处理、储存和使用进行评估和采取步骤确保它们是安全的和得到了适当的处置。

藻类和丰年虫的培育场所的进入应当仅限于获得批准的人员

来自于这些区域的人员应当不能进入其他生产区域。应当在每个车间的入口处放置一个含有消毒溶液 (>50 ppm活性成分的次氯酸钙(钠))的足浴容器。应当按需要的频度更换消毒液。与其他区域一样,应当在门口放置装有消毒液(20 ppm的聚乙烯吡咯烷酮碘剂和/或70%酒精)的容器,所有人员在进入或离开车间时都必须用消毒液洗手
 
详细叙述幼体培育中的确切投饲规则已经超出了这部手册的范围。投饲方法应当以各个幼体培育阶段的具体要求为基础,和通过对每个池中幼体摄食活动的经常和详细的检查加以调整。本节提供了需要记住的要点的指标。

<>藻类

必须在微藻的培养过程中维持极高的卫生标准

实验室阶段的微藻培养要求极高的卫生条件,包括对所有的水和空气供应进行彻底的消毒和过滤(至<0.5 μ m),通过使用杀菌器对所有的设备和水消毒,使用纯实验室标准的化学肥料和使用空调将温度维持在18-24℃之间。

应当使用适当的卫生标准和微生物学程序来维持藻类的纯种培养

像角刺藻、海链藻、等鞭金藻和杜氏藻这样的单细胞藻类是最常用的。所有使用的藻类品种的纯培养的所有阶段(从实验室的琼脂和试管/瓶培养到室外的大规模培养)都应当在现场维持、培养和次培养。应当采用适当的卫生标准和微生物程序来保证培养的质量。应当避免以藻类为食的原生动物、其他藻类品种和细菌(特别是有害的弧菌)的污染。作为一种选择,可以从著名的藻类培养实验室购买纯种初始培养液,然后采用卫生程序在孵化场的大规模培养池中生长。买一份纯藻培养液和在整个幼体培育过程中连续地进行次培养的方法是不可取的,因为这容易导致藻类的污染和最终污染幼体本身。

在每次收获之后,必须对所有的藻类培养池进行冲洗和消毒

用次氯酸钙(钠)溶液(10 ppm 活性成分)对藻类培育池进行消毒后,应当用清洁和处理过的水对培育池进行漂洗,在干池前再用10%的盐酸进行洗涤。
 
通常从无节幼体的最后阶段开始将浮游性藻类供应给幼体,这样一旦变态到最初摄食阶段(蚤Ⅰ),幼体就能马上开始摄食。在整个蚤I到糠虾阶段,通常将藻类的密度维持在80 000-130 000细胞/ml。在虾苗阶段,藻类密度有所下降,因为幼体的肉食性更强。在虾苗和幼虾养殖中,常常使用底栖性藻类,因为虾苗将开始从池壁上刮食藻类。

<>丰年虫

应当采取措施以保证丰年虫不会造成引入疾病的危险

在购买所有的丰年虫卵时,都应要求有通过PCR分析表明不带有TSV、WSSV和YHV病毒的证明。

应当对丰年虫脱膜

尽管丰年虫卵可能不带有重要的病毒病原(Sahul Hameed等 2002),它们肯定是细菌、真菌和原生动物疾病的重要来源。因此,丰年虫卵的脱膜对于避免丰年虫培养水的污染和引起幼体培育水污染的可能性是值得推荐的。

脱膜是通过对每千克需脱膜的丰年虫卵用4升海水中的40克苛性碱(NaOH)和4升氯溶液(8-10%的活性成分)来完成的。在脱膜过程中,应当将脱膜混合物保持在20℃以下和使用冰来防止对卵的损伤。

一旦丰年虫卵开始转变为橙色(标志着成功脱膜),在含有已脱膜的丰年虫的水中加入100克硫代硫酸钠进行漂洗以停止氯处理。然后可以用清洁的淡水对脱膜的丰年虫卵进行洗涤,最后保存在过饱和的盐水中直至用于孵化。

丰年虫应当在稳定的光照和充足的曝气条件下、以1-2 kg卵/吨海水的密度被孵化24小时或直至完全孵化

然后收获丰年虫和用20 ppm的次氯酸钠溶液,或更好地,用60 ppm的 T-氯胺对其消毒3分钟,然后用淡水冲洗。如果需要的话,它们可以被以活体或冰冻的形式投喂,或者放置到分开的池子内进行育肥(3-12小时),或继续养成,用于虾苗阶段的投饵。

收获丰年虫后,应当对孵化池进行彻底的清洗

收获之后,必须用清洁剂和水冲洗用于孵化丰年虫的池子,然后用浸泡在次氯酸钠溶液(20 ppm的活性成分)中的海绵进行消毒,用足量处理过(过滤和消毒过的)的水漂洗,并再次用10%的盐酸溶液洗涤。
冰冻的丰年虫幼体或成虫应当被保存在隔离和专用的冷藏柜内。必须始终执行基本的卫生规定(SOPs)。

<>人工饲料

尽管人工饲料一般不会带来疾病的危险,必须恰当地使用和储存它们

许多种人工或配方的饲料可以用于幼体培育。这些饲料种类通常不会带来象活饵料那样带来相同的健康危险,因为它们可以
被相当容易地保存在不受污染的条件下。
 
人工饲料包括干藻、液体饲料、微襄饲料、薄片和粉碎的颗粒饲料、矿物质和维生素添加剂和强化剂。这些饲料按照幼体发育的阶段以各种规格使用和依据孵化场的偏爱、水质和营养要求以不同的组合使用。但是,它们通常主要用作活饵料的补充。
通常,只要选择了优质的饲料,则将其储存在低温、干燥条件下,一旦容器被打开,就要迅速用完,不能过量使用(因为这可能导致水质问题),它们不应当显示出任何与健康相关的麻烦。

5.10幼体的健康管理

如果要生产大量优质的幼体,必须保持对孵化场幼体健康管理所涉及的诸多因素的严格控制

孵化场的幼体健康管理涉及了诸多因子。如果要生产大量优质的幼体,在整个幼体培育过程中必须保持对所有这些因子的严格控制。表5列出了在幼体养殖过程中(假设按照本节前面简述的方法放养优质的幼体)影响幼体健康的一些最常见因子。
 

表5.一些影响对虾幼体健康的因子和可能的控制方法

因子

影响

控制方法

标准

放养密度过高

应激反应

自残

水质差

降低放养密度

100-250只/升

水质差

◆海水(A)

◆池水(B)

死亡率

晚脱皮

畸型

通过过滤、氯处理

和/或消毒改善水质(A)

增加水交换(B)

滤器<5μm

活性碳

氯处理(10ppm)后进

行中和

臭氧和紫外光

每天20-100%的水交换

放养时间过长

增加了后期放养幼

体的感染率

限制育苗池放养过程的天数

每单元3-4天

投饲差

(质量和/或频率)

自残

营养不良

体表寄生物污着

水质差

适当的投饲方案

经常地检查饲料消

耗和水质情况

使用优质饲料,每2-4小时投喂一次直至吃饱

藻类的质量和/或数量

蚤状幼体阶段的死亡率

幼体的污着

定期的计数和质量检查

角刺藻或海链藻800000-130000细胞/毫升

丰年虫幼体

细菌的来源,引起死亡

丰年虫幼体消毒

20 ppm活性成分的次氯酸盐

放养密度

幼体的放养密度不应过高

放养过量可能会带来应激反应,而且在后期阶段可能导致自残和水质下降,特别是在成活率很高时。一般来说,幼体的放养密度应当在100-250只/升水(100 000-250 000/吨水)。当幼体在同一水池中生长到可收获规格时,通常采用较低的放养密度,在使用双池系统时,可采用较高的放养密度。在后一种系统中,幼体通常以较高的密度被养殖在锥形或“V”或“U”形底的池内直至IV-V期虾苗,然后在后期(底栖阶段)以减少的密度(至多100尾/升)被放养在平底池内。

低成活率可能使幼体培育池中的密度降低到维持较好饲料成本效益的水平以下(因为幼体培育池的投饲通常是按照水的体积进行,而不是幼体的数量)。

水质

必须维持良好的水质

水质对每批幼体的健康和表现有着重要的影响。不良水质会导致生长不良、成活率低、晚脱皮/发育、体表寄生物污着增加和畸形。应当将用于幼体培育的水过滤到大约5 μm和用氯、臭氧和/或紫外光消毒。至少在达到虾苗阶段前,应当将水温维持在28-32℃之间,将盐度维持在30 ppt以上。应当尽可能将溶解氧维持在饱和浓度(30℃时为 6.2 ppm)附近,但至少要高于5 ppm。pH应当被维持在8左右。投饲过量是引起水质恶化的主要原因之一,应当避免。

也可以通过足以防止吃剩食物和粪便沉积在池底(通常有必要使池底带有角度)的曝气来维持水质,而且要对池子进行经常性的虹吸以防止在池底形成厌氧的污泥。

应当小心地掌握水交换

通常,在达到糠虾阶段之前不需要水交换,虽然通常会在整个蚤状幼体阶段提高水位,因为幼体常常放养在只有一半水的池子内。在糠虾阶段之后,依据放养密度和水质指标,通常每天要换水20-100%。应当注意保证用于增加水位或替换的水的温度、盐度和pH与池子内的水相似,而且不含氯以防止造成幼体过度的应激反应。

还应当考虑在孵化场使用生物保护剂和细菌酶

作为一种维护水质的努力,为了在幼体培育过程中防止细菌的繁殖和减少或避免使用抗生素的需要,孵化场正越来越多地转向使用具有生物保护功能的有益菌和细菌酶的粉剂或溶液。对于所有这些产品和补充物,必须注意选择那些不会带来自身健康危险和效果好、成本效益高的产品。

放养时期

孵化场内幼体培育池的每一个独立单元,或更好地,整个孵化场的幼体放养应当在尽可能短的时期内完成

孵化场内幼体培育池的每一个独立单元,或更好地,整个孵化场的幼体放养应当在尽可能短的时期内完成,通常限制在3-4天。这一放养时期的延长常常引起后期放养幼体疾病发生的增加,大概是通过年长的池子向年幼池子的细菌污染。
 
这种现象通常与所谓的“蚤状幼体Ⅱ综合症”相关,晚I期蚤状幼体和早Ⅱ期蚤状幼体拒绝摄食和遭受与细菌问题相关的高死亡率。可以通过把放养时间限制在4天以内、使用生物保护剂和在孵化场的所有区域始终保持良好的清洁来控制这一问题。

营养和投饲

应当密切监控投饲的数量、质量和管理

投饲的数量、质量和管理可能对幼体的健康和成活率产生重要的影响。疏于供应充足的优质饲料可能会导致应激反应、生长不良、死亡率、自残行为的增加、畸形和体表寄生物污着程度的增加。当使用的饲料大部分为配合饲料时,这是尤为真实的。在使用配合饲料作为活体饵料的补充时,频繁地投喂少量的优质、规格适当和无污染的饲料是重要的。作为指导,颗粒的大小应当为蚤状幼体:10-5O μm、糠虾幼体:100-200μm和早期虾苗200-300 μm。通常认为每2-4小时投喂一次的频率是足够的。

为了大多数幼体的饲料需要,还是应当依赖于高质量的活饵料,包括藻类和丰年虫

但是,数量不足或劣质的藻类也可能给幼体健康带来严重的后果。例如,蚤状幼体阶段高死亡率与藻类质量有关,而这个阶段藻类的不足(<80 000-130 00O细胞/毫升)可能会导致幼体没有足够的储备以完成向糠虾的成功脱皮。应当对藻类的密度和质量进行定期的监控以保证它们对于投喂的阶段是充足的。

5.11幼体状况的总体评价

幼体状况的评估应当是孵化场开展的重要工作之一
 
幼体状况的评估通常在上午进行,对水交换、投饲和其他管理活动作出决定,这样可以在下午采取行动。应当每天对每个池子内的幼体检查2-4次。开始,对幼体、育苗池内的水质状况和投饲进行目测检查。可以用大口杯对幼体取样,然后用肉眼检查。需要对幼体的阶段、健康、活动、行为和饵料丰度和水中的粪便进行观察。可能还需要对水质指标和池内饵料数量进行记录。
 
应当将相同的或另外的幼体样本带回实验室进行更详细的显微检查。这将提供关于发育阶段、状况、摄食和消化及出现任何疾病或体形上畸形的信息。
在培育过程中,还可一次或两次将样本送到PCR实验室进行病毒性疾病的分析和筛检。
根据表2描述的健康评估级别,观察的种类可以被分类为三个级别。

一级观察

一级观察是以幼体和水状况的简单视觉特征为基础的,这些特征可以从池中取出的一玻璃大口杯内的动物样本上用肉眼观察到。应当对幼体的行为或活动给予特别的关注,它们的游泳行为(按照幼体阶段)、水质、存在的饲料和粪便和后来在规格上的差异和一致性。表6归纳了所采用的观察指标和评分系统。
 

表6.幼体一级健康评估概要

 
标准 得分 阶段 观察

游泳活动

活泼(>95%)

中等(70-95%)

弱(在底层)(<70%)

10

5

0

所有阶段

每开观察(2-4次)

趋光性

积极的(>95%)

中等的(70-95%)

消极的(<70%)

10

5

0

蚤状幼体

每天观察(2-4次)

粪便条(cord索)

存在(90-100%)

中等(70-90%)

缺少(70%)

10

5

0

蚤状幼体

每天观察(2-4次)

发光

没有

存在(<10%)

大量(>10%)

10

5

0

糠虾

培育池夜间观察

阶段同步性

高(80-100%)

中等(70-80%)

低(<70%)

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

肠道内含物

充满(100%)

半满(50%)

空(<20%)

10

5

0

糠虾

每天观察(2-4次)

游泳行为

幼体的游泳行为变化剧烈,但通常贯穿整个幼体时期。I期蚤状幼体阶段会迅速地一直向前游动,通常在水中环游,滤食浮游植物。与之相对照的是,糠虾通过其尾节的间歇性弹动向后游动,使身体保持在水层中,通过视觉摄食浮游植物和动物。虾苗阶段又恢复到快速和持续地向前游动,最初摄食浮游生物,至少从IV-V期虾苗开始,转为底栖性和寻找食物,除非被强烈的曝气维持在水层中。按照这些明显的游泳方式,如果观察到95%以上的幼体活跃游泳,则给其打10分;如果70-95%的幼体游泳活跃,则给其打5分;而如果活跃游泳的幼体低于70%,则给其打0分。

趋光性

蚤状幼体应当保持很强的绝对趋光性和向朝着灯光运动。在检查这一特点时,将幼体的样本放置在紧靠光源的一个半透明的容器内,然后观察幼体的移动。如果95%或更多的幼体积极地朝着亮光运动,幼体质量优良和给其打10分;如果70-95%的幼体作出反应,幼体的质量可以接受和给其打5分;如果不足70%的幼体向亮光运动,则认为幼体体质弱和给其打0分。

粪便条(索)

在蚤状幼体I期,蚤状幼体几乎专门以藻类为食,可以观察到长粪便条从肛门被挤出和散开在水层中。如果90-100%的幼体在整个肠道内有这种长而连续的粪便条贯穿其身体和延长至体外 ,则认为其摄食良好和给其打10分。如果70-90的幼体有这种粪便条,或粪便条较短或不连续,则给其打5分;当不足70%的幼体有这种粪便条,则表明幼体不进行摄食,给其打0分。

发光

在绝对黑暗的条件下,在幼体培育池内对这一因子进行直接观察。幼体的发光通常是由于存在着像Vibrio harveyi这样的发光细菌。如果观察不到发光现象,给其打10分;如果观察到较低的发光性(不超过群体的10%),给其打5分;如果观察到超过群体10%个体发光,给其打0分。

阶段同步性

这反映了一个池子内幼体的一致性。如果群体中80%或更多的个体处在同一阶段,则给其打10分;70-80%的个体处在相同阶段,则给其打5分;如果处于同一阶段的个体不足70%,则给其打0分。

应当注意到在幼虾脱皮时,观察到阶段同步性的下降是正常的,因此,要考虑确定阶段同步性的适当时间。这对于处在脱皮过程中的虾苗也是相同的。

肠道内含物

在幼体后期阶段可以观察到肠道的内含物。从幼体头部的肝胰腺开始,可以看到肠道是一条黑线,当幼体被放在一个像玻璃大口杯这样的明亮容器内时,可以容易地观察到肠道。这对于反映幼体的摄食和食物可得性是有用的。如果观察到大多数幼体的肠道是充满的,则给其打10分;如果一半幼体的肠道内有食物,则给其打5分;如果不足20%的幼体肠道内有食物,则给其打0分。

二级观察

二级观察是以显微检查和压片标本为基础的,在必要时,从每个池子中至少随机取样20只幼体(较大的池子取样数量更多)。要对肝胰腺的状况和消化道内含物、坏疽和肢体畸形、污着生物和后期幼体粪便和肝胰腺中存在的杆状病毒给予特别的关注。表7归纳了这些观察指标和使用的评分 体系。
 

表7.幼体二级健康评估概要

指标 得分 阶段 观察

肝胰腺(脂肪胞)

高(>90%)

中等(70-90%)

低(<70%)

10

5

0

所有阶段

每开观察(2-4次)

肠道内含物

充满(>95%)

中等(70-95%)

空(<70%)

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

坏疽

无(0%)

中等(<15%)

严重(>15%)

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

畸形

无(0%)

中等(<10%)

严重(>10%)

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

 

体表寄生物

无(0%)

中等(<15%)

严重(>15%)

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

“弹球”·

1-3

>3

10

5

0

所有阶段

每天观察(2-4次)

杆状病毒

无(0%)

中等(<10%)

严重(>10%)

10

5

0

 

糠虾

每天观察(2-4次)

 

·表示为消化道内“弹球”数目的肝胰腺和肠道坏死细胞

肝胰腺状况和肠道内含物

肝胰腺状况提供了幼体摄食和消化的指标。使用置于显微载玻片上的幼体样本的湿标本在放大40倍下进行观察。显示出活跃摄食和消化的健康幼体,肝胰腺和中肠道内充满了微小和容易看到的泡(消化或“油脂”泡)和观察到肠道内强烈的蠕动。如果90%或更多的个体显示丰富的油脂泡和/或充满的肠道,则给其打10分;如果样本中70-90%的个体具有油脂泡和/或中等充满的肠道,则给其打5分;如果不足70%的个体具有油脂泡或肠道是空的,则给其打0分。

坏疽

幼体躯体和肢体的坏疽是自残或可能的细菌感染的标志,可以通过光学显微镜在低倍下观察。如果没有坏疽,则给其打10分;如果少于15%的个体显示出一定的坏疽,则给其打5分;而如果超过15%的个体出现了坏疽 ,显示出存在着严重的感染,则给其打0分。

畸形

在幼体早期阶段的畸形反映了幼体质量差,而在后期阶段则反映了细菌感染或处置不当和应激反应。通常,幼体肢体的细刚毛或其额刺可能会出现弯曲、折断或缺少;尾节可能会弯曲;或肠道可能在肛门之前结束。通常,无法对这些问题作出补救(除非是由野蛮的操作所致),这些畸形的幼体会死亡。在情况严重时,可能最好尽快地放弃整个池子内的幼体以防止对其他池子的传染。如果没有畸形,则给其打10分;如果少于10%的个体出现畸形,则给其打5分;而如果超过10%个体出现畸形,则给其打0分。

污着的体表寄生物

幼体可能会成为从细菌和真菌到多种原生动物的一系列污着生物的寄主。它们通常附着于身体和头部的外骨骼上,特别是在幼体鳃的周围。如果感染轻微,下一次脱皮可以去掉污着物,而不会有进一步的问题。但在严重的情形下,污着物会持续或在下阶段重新出现,这反映了水质不良和需要采取行动。如果没有污着物存在,给其打10分;如果不足15%的个体出现了暂时或持续的污着物,给其打5分;而如果超过15%的个体出现了持续的污着物,则给其打0分。

杆状病毒

通常可以用高倍光学显微镜辨认典型的病毒闭合体(对于MBV来说,是黑色和四面体的)的方法来发现幼体整体或大规格幼体的肝胰腺或粪便条压片标本(斑节对虾杆状病毒采用孔雀石绿染色)中的杆状病毒。杆状病毒的表达通常是由应激反应调节的,如果发现,降低应激反应的水平通常会减少其流行和相关的生长下降问题。如果未发现杆状病毒,则给其打10分;如果不足10%的个体发现了杆状病毒,则给其打5分;如果超过10%的个体受到感染,则给其打0分。

“弹球”

“弹球”是给涉及肠道和肝胰腺上皮细胞脱落症状取的西班牙语名称,它表现为消化道内的小球。人们认为它是由细菌引起的,而且可能是致命的。采用育苗池的快速放养、生物保护剂的使用和良好的健康和投饲管理实践,在预防“弹球”方面取得了一定的成功。

一级、二级评分的价值

一旦对每个幼体培育池的每一阶段进行了一级和二级观察和记录,对每种情形进行了适当的打分,由此可得出幼体健康的总体印象,较高的数值则反映了比较健康的幼体,反之亦然。根据获得的分值加上经验,使得评估每个幼体池中的总体健康状况和推荐克服所遭遇问题的方略变得容易。

三级观察

在虾苗准备好在养成设施中放养之前,通常不需要使用分子技术和免疫诊断方法的三级观察。PCR和点渍技术通常用于检测重要的病毒病原。但是,建议采用PCR技术,因为它相对于点渍法来说更加敏感。

5.12 应当采取优良的孵化场管理以保证高质量的虾苗

用于放养的虾苗的选择

许多因素影响虾苗的质量。饲料的质量和数量、脱皮、水质(温度、盐度、氨、悬浮固体物质和粪便等),使用抗生素、疾病和不良管理操作都会对孵化场生产的虾苗质量产生影响。这些因素可以通过采用良好的孵化场管理实践来控制,这会对生产的虾苗的质量生产重要的影响。

如前所述,幼体生产计划应当以尽可能生产高质量的虾苗为目标,因为此后的养成过程中的表现与虾苗质量是直接相关的。因此,虾苗质量在养成阶段是最重要的。

有许多健康和质量指标可以被用于虾苗选择的决定。这些指标被归入前面提到的(见表2)三个大类或级别,并在表8、9、10中被详细叙述。

脱皮

当有意进行收获和运输的时候,应当检查虾苗是否在容易地脱皮,因为脱皮不顺利会降低这一敏感时期的成活率。还要检查确定没有脱皮粘附在虾苗的头部,这会导致触角弯曲和阻碍摄食和最终的饥饿和死亡。这往往是由于投饲不足、食物质量差和/或通常与水质不良相关的细菌性疾病引起的。因而,可以通过增加水交换和修改投饲方案来解决这一问题。

采用一级程序对虾苗质量进行评估

游泳行为

应当使用7.12.1节描述的用于幼体的技术对虾苗游泳行为的活力进行评估和作为虾苗健康的总体指南。也可将虾苗放在一个碗内和用手指使水旋转。健康的虾苗应当使身体迎着水流,而不是无法抵抗水流,沉到碗底成为一堆。它们还应当通过跳跃对敲打碗边作出反应。
 

表8.采用一级程序的虾苗质量评估概要

指  标

观  察

定性评价

得  分

脱皮

脱皮在水中

脱皮不粘附在虾苗

头部

<5%

10

5-10%

5

>10%

0

游泳行为

虾苗游泳行为的活

跃程度

积极

10

中等

5

0

发光现象的直接观察

池子的夜间观察

<5%

10

5-10%

5

>10%

0

成活率和临床诊断史

每个池子成活率的

估计

>70%

40-70%

<40%

10

5

0

发光

应当使用7.12.1节为幼体描述的技术或后面描述的二级技术来确定作为可能的病原性弧菌种类感染迹象的发光的普遍性。出现发光时需要立即的治疗(生物保护剂的使用有时能取得良好的结果)以防止更加严重的感染。

成活率

应当对每个池子内虾苗的成活率进行估计,作为总体健康状况、临床诊断历史和培育期间没有问题的指标。
通过对随机取样的多于20只虾苗(如果适当的话)的目测来完成虾苗健康一级评估的每一项,和应用在表8中详述的评分体系。

使用二级程序对虾苗进行评估

二级评估对从每个池子中随机取样的超过20只的虾苗用低倍和高倍光学显微镜进行检查。然后用表9详述的评分系统对生产的每批虾苗的质量进行评分。

肌肉不透明

应当对虾苗的躯体进行检查,集中于第4-5腹节附近的虾尾弯曲处。由于包括细菌感染在内的各种原因,正常透明的肌肉会变成不透明。这一问题可以是相当严重的,如果不加处理可能会是致命的。

畸形

应当对虾苗进行各种畸形的检查以评估总体健康状况,包括额刺的弯曲、由于脱皮问题导致的头部增大或由于细菌感染引起的肢体缺少或损伤。有些畸形是致命的。

规格差异

为了确定规格差异,需要单个地测量至少50只虾苗的长度和计算平均体长和标准偏差。通过把标准偏差除以平均体长获得变异系数(CV)。如果CV等于或小于15%,认为规格差异小(打10分);如果CV在15%与25%之间,规格差异中等(打5分);而如果CV大于25%,规格差异大(打0分)。
在虾脱皮时,通常CV会增大,因此,应当对确定的CV的时间给予考虑。如果发现CV值大,应当在一天后重复检测,以提供整个群体完成脱皮所需的时间。

肠道内含物

应当根据表9所列指标对肠道的内含物及其外观(不仅是颜色)进行检查以评价虾苗的摄食水平。出现空的肠道可能是疾病的第一个征兆,或可能只是由于投饲的不足。对于任何一种情况,都应当立即进行调查。在取样后立即检查虾苗是重要的。

肝胰腺的颜色

肝胰腺不应是透明的,而应当有良好的颜色。通常,它的颜色应当是深黄的铁色或赭色,但是,肝胰腺的颜色可能在很大程度上受到投喂食物的质量和颜色及使用的池子的影响。肝胰腺较深的颜色通常反映了较好的健康状况。在使用某些薄片饲料时必须特别小心 ,因为这些饲料可能会含有几乎能把肝胰腺染成黑色的颜料,而不一定对动物的健康有所贡献。

肝胰腺的状况

应当对虾苗的肝胰腺进行检查以确定其总体状况,这首先是由大量的油脂泡和它的总体大小指示的。相对较大的肝胰腺和含有大量的油脂泡被看成是良好健康的一个标志。带有含有较少油脂泡的较小肝胰腺的虾苗是投饲不足的征兆,可能需要在收获之前改善投饲以提高它们的质量。

体表寄生物的污着

应当对污着在虾苗外骨骼或鳃上的任何体表寄生物或有机物(通常由像聚缩虫、钟形虫、累枝虫或Acineta这样的原生动物、丝状细菌或污物和有机物构成)进行检查。污物能够在脱皮中或用至多20-30 ppm的福尔马林处理一小时(保持充足的曝气)被除去。

发黑

应当对虾苗的发黑进行检查,这通常发生在肢体受到伤残或细菌感染的时候。过分的体色发黑是需要关注和要求通过水质和投饲方式,有时降低放养密度以防止自残和减少细菌的浓度来进行处理的理由。

鳃发育

应当对鳃的发育进行检查,因为这能为虾苗何时能适应盐度变化提供指导,盐度变化常常发生在虾苗被转移在养成设施过程中。当鳃片已经变成象圣诞树那样分枝和大约在IX-X期虾苗时,虾苗通常能够适应相当急剧的盐度变化(至1 ppt/小时、最低5 ppt,或0.1 ppt/小时至5 ppt以下),和能够轻易地适应养成环境。如果鳃片仍未分枝,则不应将虾苗暴露在很大或急剧的盐度变化中,应当认为虾苗还没准备好被从虾苗池中转移出去。

肠道蠕动

应当在高倍显微镜下对虾的肠道进行检查以确定肠道肌肉的蠕动活动。强烈的肠道蠕动与充满的肠道结合在一起成为健康良好和营养状况良好的标志。

杆状病毒

见43页。

肌肉与肠道比例

应当对虾苗尾部第六腹节的腹部肌肉和肠道的相对厚度进行显微检查以确定肌肉与肠道比例。这可以为虾苗的营养状况提供有用的指示。较高的肌肉与内脏比例是理想的(见表9)。

表9.采用二级程序的虾苗质量评估概要

指  标

观  察

定性评估

得  分

肌肉不透明

虾苗尾部肌肉不透明

<5%

10

5-10%

5

>10%

0

畸形

头部和肢体的畸形

<5%

10

5-10%

5

>10%

0

规格差异(CV) 虾苗规格差异系数的计算 <15% 10
15-25% 5
>25% 0
肠道内含物 消化道的充满程度 10
中等 5
0
肝胰腺颜色 肝胰腺相对着色 10
失色 5
透明 0
肝胰腺状况 油脂泡的相对数量 丰富 10
中等 5
0
体表寄生物污着 体表寄生物的污着程度 <5% 10
5-10% 5
>10% 0
发黑 躯体或肢体的发黑 <5% 10
5-10% 5
>10% 0
鳃发育 鳃片分枝程度 完全 10
中等 5
微小 0
肠道蠕动 肠道肌肉的运动 10
5
杆状病毒 每日(2-4次)观察糠虾 无(0%) 10
中等(<10%) 5
严重(>10%) 0
肌肉对肠道比例 肌肉与肠道厚度之间比例的比较 >3:1 10
1-3:1 5
<1:1 0
“弹球”(肝胰腺和肠道的脱落细胞) 消化道内弹球的数目 10
1-3 5
>3 0
应激检验 如果<75%,建议再次检验 >75% 10

“弹球”(肝胰腺和肠道的脱落细胞)

参照43页。

应激检验

在收获或一旦虾苗达到X期时,可以进行应激检验。有几种应激检验的方法,而最普通的方法是将大约300尾随机取样的虾苗样本放入盐度为零的大口杯中保持30分钟,然后放回到盐度为35ppt(原环境的)水中再保持30分钟。在此后计数成活的个体数和计算具有忍耐能力个体的百分比。不应在虾苗脱皮过程中进行应激检验,因为在此期间虾苗会发生过度的应激反应。有些孵化场使用100ppm的福尔马林浸泡30分钟作为应激检验,也能取得相似的效果。

采用三级程序的虾苗质量评估

三级评估应当按统计学确定(为了使结果在2%的普遍度下提供95%的可信度)的来自每个虾苗池内虾苗的只数(通常群体>10 00O只时,取150只),采用PCR技术对重要的病毒病原进行检测。这种检测应当由能够胜任的健康实验室按照标准程序,遵循采样、保存和运输的所有规定来开展。关于疾病检测取样的详细阐述,见OIE(2003)。
如果阴性和阳性对照同时提供了其相应的预期结果,对于所有这些病毒性病原可以接受的唯一结果是阴性结果(给其打10分-见表10)。
 
表10.采用三级程序的虾苗质量评估概要

分  析

观  察

定性决定

评  分

PCR

WSSV/YHV

阴性

10

IHHNV

阴性

10

TSV

阴性

10

5.13 放养的危险评估

应当使用一个归纳了三个级别的虾苗质量的表格和分数系统来决定虾苗的命运

必须对放养特定一批虾苗的危险进行仔细的评估。

是否放养某一批虾在根本上是一种对危险的评估。无法提供固定的指导或标准,因为这通常源于经验。但是,以下指南可以用于减小在南美白对虾池塘养殖中遇到死亡率或生长不良的危险。在这种危险评估中,评价重要性的顺序为三级>二级>一级。

可以使用以下标准:
·虾苗必须通过三级评估。

·在虾苗通过三级评估时,以下指南适用于二级评估:

·如果虾苗通过了二级评估,以下指南适用于一级评估:

5.14 虾苗的运送和转移

必须对对虾苗进行仔细和适当的包装,以运送到养成设施

根据运输时间和方法,可以以500-1000只/升的密度用大水槽或带有塑料袋的箱子运输虾苗。通常使用容量在25-30升的两只塑料袋(一只在另一只内),注入10-15升过滤过的水,装人所需要数量的虾苗,然后通过进入水中的气泡加入纯氧。作为食物来源,通常每运输4小时为每只虾苗加入大约15-20只活的丰年虫幼体。也可以在每袋中加人数粒洗净的新活性碳颗粒,以帮助在长时间运输中维持较低的氨浓度。然后用橡皮筋将塑料袋密封和将其装入密封的纸板箱(适用于短距离运输)和/或聚苯乙烯箱内(以提高在长距离中的隔热效果)。

运输过程中采用的温度和放养密度将随着运输的时间和运送的距离发生变化。通常,如果孵化场接近养殖场地点,则无需降温,但运输时间在1-3小时,要把温度降低到25-28℃;运输时间在3-12小时,要把温度降低到23-25℃;运输时间超过12小时,则要把温度降低到18-23℃。这样的温度降低是为了降低虾苗的代谢速度,因而在运输过程中少消耗氧气、少排泄废物和保持安静。运输用水的盐度应当是虾苗适应的盐度,这一盐度也应当与养成设施中预期的盐度相似。

应当遵守严格的生物安全性措施

应当在使用前后对所有的运输容器和器材(网具、气石、气管等)进行消毒(其程序见本文的适当章节)。如果使用塑料袋,在使用后应当将其焚毁;它们不应当被再次用于虾苗或亲虾的运送。

运送虾苗的车辆是潜在的污染源,因为它们在运送的途中可能会到过若干个养殖场和孵化场。如果可能,应当在与生产设施相隔离的地点进行虾苗的包装,而且在进入孵化场之前应当对运输卡车(至少车轮和车胎)进行消毒。

5.15文件资料和记录的保存

应当建立全面和直至最近的文件资料和记录保存系统

良好的文件资料和记录保存对于任何良好的管理操作体系都是必需的。形成一套详细的书面标准操作程序(SOPs)和建立经常性的员工培训计划体系是重要的。对SOPs进行经常性的回顾和保持其最新性也是重要的。

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7.附件Ⅰ-负责汇编本文件的人员

1.Victoria Alday de Graindorge博士,TCP/RLA/0071地区协调官,INVE科技,Hoogveld 93,B-9200 Dendermonde,比利时,电子信箱:v.alday-sanz@inve.be


2.Marco Alvarez Galvez先生,海洋科学和海运工程学院,厄瓜多尔瓜亚基尔市09-01-5863信箱,电子信箱:marcoalvarezgalvez@hotmail.com

3.J.Richard Arthur博士,6798,Hillside Drive,Sparwood,B.C.加拿大V0B 2G3,电子信箱:rarthur@titanlink.com

4.Lorenzo Becerra先生,水生动物健康项目主任,国家水产养殖局长,Calle 2da Carrasquilla,Panamá,巴拿马,电子信箱:lbvpa@yahoo.com

5.Ronald Antonio Bernal Guardado博士,OIRSA萨尔瓦多代表,Organismo Internacional Regional de Sanidad Agropecuaria(OIRSA),Final 1a.Av.Nte Y 13 C.Ote.,av,Manuel Gallardo,Nueva SanSalvador,萨尔瓦多,C.A.,电子信箱:rbernal@telemovil.com

 


6.Melida Boada女士,Instituto Nacional de Investigaciones Agricolas delos Estados Suere y Nueva Esparta(INIA-S/NE),Av.Carupano,sectorCaiguire,Cumana 6101,委内瑞拉,电子信箱:melidaboada@yahoo.es

7.Mathew Briggs博士,顾问,5/16 Fisherman Way,Vises Road,Rawai,phuket 83130,泰国,电子信箱:koygung101@yahoo.co.uk

8.Cesareo Cabrera先生,太平洋海水养殖,墨西哥,电子信箱:cesareo@maricultura.com.mx

9.Rodolfo Cadenas,水产养殖处-SARPA处长,Ministerio de la Producción y el Comercio.Servicio Autónomo de Pesca y Acuicultura,Torre este,piso 10,parque central,Caracas,委内瑞拉,电子信箱:r_cadenas@hotmail.com

10. Francis Carolina Cardona Romero女士,Direcclón General de Pesca y Acuicultura,Av La粮农组织 Boulevard Miraflores,Tegucigalpa,洪都拉斯,电子信箱:jag_cr63@yahoo.com

11.Felix Carranza先生,水生动物健康国家协调员,Direccion de Salud Animal,Barreal Heredia Costa Rica,Codigo Postal3 —3006 Cenada,哥斯达黎加,电子信箱:fcarranza@protecnet.go.cr

12.María Cristina Chavez Sanchez博士,高级科学家,Mazatlán Unit on Aquaculture and Environmental Management of CIAD,A.C.Section:Aquaculture,Histopathology Lab.,Av.Sábalo Cerrtos s/n,Apdo Postal 711.Mazatlán,CP. 821010,Sinaloa,墨西哥,电子信箱:marcric@victoria.ciad.mx

13.Elizabeth de la Cruz Suarez博土,海水养殖项目主任,Biology Faculty,Universidad Autonoma de Nuevo Leon,Cd.Universitaria66450,San Nicolas de los Garzas,Nuevo Leon,墨西哥,电子信箱: lecruz@inp.semarnap.gob.mx

14. Roger Doyle教授,遗传计算有限公司,1030 Beaufort Av.Halifax,Nova scotia, 力拿大B3H3Y1,电子信箱:rdoyle@genecomp.com

15.Jorge Erraez先生,隔离检疫处处长,INP,09-01-15131信箱,Guayaquil,厄瓜多尔,电子信箱:jerraez@yahoo.es

16.Flor Delia Estrada Navarrete女士,研究员,Laboratorio de Sanidad Acuicola,Instituto Nacional de Pesca,Sabalo Cerritos s/n,Col.Estero El Yugo,Mazatlam,Sinaloa,墨西哥,电子邮箱:flor@ola.icmyl.unam.mx

17.Daniel Fegan先生,对虾专家,BIOTEC,泰国,Apt.1D,Prestige Tower B,168/25 Sukhumvit 23,Klongtoey,Bangkok 10110,泰国,电子邮箱:dfegan@usa.net

18.Leonardo Galli先生,研究和发展执行经理,国家养虾公司,沙特阿拉伯,电子邮箱:gallimat@hotmail.com

19.Christian Graf先生,Consultor en maduracion y programas de reproductores,Cdla Entrerios,Guayaquil,厄瓜多尔,电子邮箱: barandualab@yahoo.com

20.Lachlan Harris博士,Seaquest S.A.经理,Via San Jose-Curia,Guayaquil,厄瓜多尔,电子邮箱:sqharrys@telconet.net

21.Allan Heres先生,兽医/微生物局,117 E.Lowell St.room 108, Tucson,Arizona,85721美国,电子邮箱:aheres@u.arizona.edu

22.Fernando Jimenez博士,水生动物健康主管,CONAPESCA-SENAICA SAGARPA,Sta.Barbara 2212 Cal.R.Florlda Monterrey
N.L.,México C.p.64810,México D.F,墨西哥,电子邮箱:fhjimenez@hotmail.com

23.Eitel Krauss V先生,生产经理,Aqualab S.A Aqualab S.A Aqualab S.A,Av.9 deoctubre,1911.Ed. Finansur P-7. Guayaquil,墨西哥

24.Anabel Leyva Rojo女士,Super Shrimp S.A.de C.V.,AV.CamaronSabalo No.310,Loc.25 y 26 C.P. 82110,Zona Dorada,Mazatlan,Sinaloa,墨西哥,电子邮箱:anabel.rojo@usa.net

25.Luis Arturo Lopez Paredes先生,渔业和水产养殖专家,Unidad de Manejo de la Pesca y Acuicultura(UNIPESCA),Km22 Carretera.Pacífico Barcenas Villa Nueva;Edificio de la Ceiba,3er nivel,Guatemala,危地马拉,电子邮箱:unipesca@c.net.gt

26.Gustavo Maranges先生,主管,GEDECAM,5ta avenida a 246 Barlovento,Santa Fé,Playa,Ciudad de la Havana,古巴

27.Leonardo Mariduena先生,主管,Camara Nacional de Acuacultura,Av.Francisco de Orellana Centro Empresarial las Camaras,3°Piso,Guayaguil,厄瓜多尔,电子邮箱:lmariduena@can-ecuador.com

28.Enrique Mateo Salas先生,科学顾问,秘鲁海洋研究所(IMARPE),Esquina de Gamarra y Gral.Valle-Chucuito,Callao,秘鲁,电子邮箱:ecmateos@infonegocio.net.pe

 

29.Ana Bertha Montero Rocha女士,墨西哥项目协调官,Instituto Nacional de la Pesca(INP),Secretaria de Agricultura,Ganaderia,Desarrollo Rural,Pesca y Alimentacion(SAGARPA),Pitágoras 1320,Sta Cruz Atoyac,C.P.03310.México D.F.,墨西哥,电子邮箱: anabmont@servidor.unam.mx

30.Leobardo Montoya Rodriguez先生,研究员,Centro de Investigacion Alimentacion y Desarrollo(CIAD),Unidad Mazatlán en Aculcultura y Manejo Ambiental del CIAD,A.C,Av.Sábalo-Cerritos s/n.Apdopostal 711,CP. 82010,Mazatlan,Sinaloa,墨西哥,电子邮箱: montoya@victoria.ciad.mx

31.Milton Moreno先生,国家水产养殖主管,Ministerio de Desarrollo Agropecuario,Apdo Postal 5390 zona 5,Panama,巴拿马,电子邮箱: kristin@cerco.net

32.Eugenio Enrique Obando Acosta先生,主席,Acualarvas Paraguana C.A.‘Acualpaca’,Calle Tabana—Puerta Maraven,Punto Fijo Edo.Falcón,委内瑞拉,电子邮箱:acualpaca@unete.com.ve

33.Alvaro Otarola Fallas先生,水产养殖部主任,Instituto Costarricense de Pesca y Acuacultura(INCOPESCA),Guapiles,Estacion los Diamantes,Guapils,哥斯达黎加,电子邮箱:otarosan@racsa.co.cr


34.Teodosio Pacheco先生,质量控制项目主管,Centro Regional de Investigaciones Pesqueras Unidad Mazatlán(CRIP),Calzada Sábalo-Cerritos S/N,Colonia estero El Yugo,Mazatlán, Sinaloa,C.P:82010,墨西哥,电子邮箱:tpachecq@red2000.com.mx

35.Grissel Perez女士,对虾残留控制项目,国家渔业和水产养殖研究所(NAPESCA),Venezuela,Caracas,委内瑞拉,电子邮箱: qualitech@etheron.net

36.Melba B.Reantaso博士,水生动物研究病理学家,牛津合作实验室,马里兰自然资源局,904 S.Morris Street,Oxford MD 21654,美国,电子邮箱:MReantaso@dnr.state.md.us

37.Andrea Reneau女士,鱼类健康机构,伯利兹农业健康局,中央研究实验室,食物安全局,P.O.Box 181,St.Joseph Street,Belize City,伯利兹,电子邮箱:foodsafety@btl.net

38.Ruben Roman 先生, 对虾虾苗养殖实验室主任,CENAIM,Km30.5via perimetral,la Prosperina,Guayaqul,厄瓜多尔,电子邮箱: rroman@cenaim.espol.edu.ecu

39.Lucia Saavedra Cuadra女士,ADPESCA/MIFIC,Costado Este hotel lntercotinental,Metrocentro,尼加拉瓜,电子邮箱: liscni26@yahoo.com

40.Lorena Schwarz Gilabert女士,经理,Centro de Servicios para la Aculcuitura(CSA),Km30.5 via perimetral,la Prosperina,Guayaquil,厄瓜多尔,电子邮箱:lschwarz@espol.edu.ec

41.Raquel Silviera Coffigny女士,水生动物健康部主任,Centro de Investigaciones,古巴,电子邮箱:raquel@cip.fishnavy.inf.cu

42. Rohana P. Subasinghe博士,(咨询会技术秘书处)高级官员,内陆水资源和水产养殖部,渔业局,联合国粮农组织,Viale delle Terme di Caracalla,00100 Rome,意大利,电子邮箱:Rohana. subasinghe@fao.org

43.Cleber Tailor Melo Carneiro先生,动物实验室协调官,Departamento de Defesa Animal,Secretaria de Defesa Agropecuaria de Ministerio de Agricuiultura,Pecuaria y Abastecimento,Ministerio de Agricultura,Pecuaria y Abastecimento,Esplanada dos Ministerios Bloco D,Anexo/Ala A sala 317,Brasilia—Distrito Federal,CEP:
70.043.900,巴西,电子邮箱:clebertm@agrilcultura.gov.br

44. Zobeyda Valencia de Toledo女士,渔业和水产养殖发展中心(CENDEPESCA),Final 1 avy Nte 13 Cote,Av. Manuel Gallardo,Nueva San Salvador,萨尔瓦多C.A.电子邮箱:zvalencia@mag.gob.sv

45. Consuelo Vasquez Diaz女士,捕捞和水产养殖国家研究所(INPA),Apartado Aereo 33146,Bogota D.C.,哥伦比亚,电子邮箱: consuvasquez@hotmail.com
 


[2]  或次氯酸钙

[3]  氯的存在通过黄颜色显示出来

[4]  也可以使用盐度变化。

[5]  详情见41页

[6]  过去,盐酸指以3:1混合的盐酸和硝酸,但是现在指34-37%的盐酸。

[7]  在使用福尔马林时,避免使用容器底部的白色沉淀物(甲醛),因为它是毒性很强的物质。

[8] 过去,盐酸指以3∶1混合的HCI和HNO3,但现在指34-37%的HCl。


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