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9. DETERMINACION IN VIVO DE DIGESTIBILIDAD DE ALIMENTOS E INSUMOS ACUICOLAS A TRAVES DEL METODO CON INDICADOR GUIA DE LABORATORIO

Por:
Juan Antonio Manríquez H.
Fundación Chile

9.1. Principio del método

Medir la absorción de nutrientes por el aumento de la concentración de un marcador indigestible entre alimento y heces; estas últimas pueden recolectarse aleatoriamente, sin necesitar hacerse una recolección total.

Etapas:

  1. Recepción de la muestra (alimento comercial o insumo).

  2. Preparación del pienso experimental semi-húmedo y del control.

  3. Evaluación de los piensos con trucha arcoiris.

  4. Análisis químico de piensos y material fecal.

9.2. Recepción de la muestra (Alimento comercial o insumo)

9.3. Preparación del pienso experimental semi-húmedo y del control

9.3.1 Materiales

1.Caseína;2.Gelatina;3.Dextrina;
4.Aceite de pescado;5.Cloruro de colina;6.Mezcla vitamínica;
7.Mezcla de minerales;8.Alfa celulosa;9.Carboximetilcelulosa;
10.Oxido crómico;11.Molino;12.Mezcladora;
13.Prensadora;14.Congelador;15.Balanza;
16.Espátula;17.Cuchillo;18.Mechero.

9.3.2 Procedimientos

a) Preparación de piensos a partir de alimentos comerciales

1Llegada de muestras;2.Molienda de muestras;
3.Mezcla de muestras con óxido crómico;4.Disolución de la gelatina;
5.Mezcla de gelatina con insumos;6.Elaboración de “tallarines”;
7.Corte de “tallarines”;8.Mantención de alimento congelado.

b) Preparación de piensos a partir de un insumo, p. ej. harina de pescado

1.Llegada de muestras;2.Mezcla de muestras con otros ingredientes (excluida la gelatina);
3.Molienda de la mezcla;4.Disolución de la gelatina
5.Mezcla de la gelatina con insumos;6.Elaboración de “tallarines”;
7.Corte de “tallarines”;8.Mantención de alimento congelado.

c) Preparación de pienso control

1.Mezcla de ingredientes (excluida la gelatina);2.Molienda de la mezcla;
3.Disolver gelatina;4.Mezclar gelatina con insumos;
5.Elaboración de “tallarines”;6.Corte de“tallarines”;
7.Mantención de alimento congelado.  

9.4. Evaluación de los piensos con trucha arcoiris

9.4.1 Materiales

1.Estanques tipo “Cho”;2.Sistema de circulación de agua (sin cloro), con flujo controlable;
3.Doce kilogramos de trucha arcoiris (20 g c/u);4.Tubos de centrífuga;
5.Centrífuga;6.Balanza;
7.Estufa;8.Congelador.

9.4.2 Procedimiento mantención de estanques

  1. Aclimatar truchas de 20 g a estanques e ingesta de óxido crómico (2 semanas);

  2. Mantener 4 kg de trucha aclimatadas en cada estanque;

  3. Alimentar por 3 días con alimento a analizar, para acostumbramiento;

  4. Alimentar por 4 días para análisis (2% peso vivo diario);

  5. Limpiar estanques y tubos de decantación antes de retirarse en la tarde;

  6. Recolectar muestras del material fecal en la mañana.

9.4.3 Procesamiento de las muestras

1.Calibrar tubos de centrífuga;2.Centrifugar muestras: 1,200 g por 20';
3.Eliminar sobrenadante;4.Secar muestras a 50°C por 24 h;
5.Conservar muestras secas congelas hasta análisis químico.

9.5. Análisis químico de piensos y material fecal

9.5.1 Materiales

  1. Molibdato de sodio - 2 agua (Na2MoO4·2H2O);

  2. Acido sulfúrico concentrado (H2SO4);

  3. Acido perclórico 60% (HClO4);

  4. Oxido crómico (Cr2O3);

  5. Dicromato de potasio (K2Cr2O7);

  6. Espectrofotómetro;

  7. Matraces Erlermeyer de 100 cm3;

  8. Matraces de aforo de 100 cm3;

  9. Plancha calefactora.

9.5.2 PREPARACIÓN SOLUCIÓN DIGESTIVA

  1. Disolver 20 g de molibdato de sodio en 300 cm3 de agua destilada;

  2. Añadir lentamente 300 cm3 de ácido sulfúrico concentrado;

  3. Enfriar la mezcla;

  4. Agregar 400 cm3 de ácido perclórico 60%.

9.5.3 Preparación de curva estándar de cromo con dicromato de potasio

  1. Poner a digerir varias muestras diferentes de alimentos y heces;

  2. Diluir hasta 100 cm3 con agua destilada;

  3. Titular con una solución tipo hidróxido de sodio;

  4. Determinar la molaridad media;

  5. Hacer una solución patrón de agua destilada y dicromato de potasio. Usar 0.283 g por litro;

  6. Sacar varias alicuotas;

  7. Diluir con agua destilada y ácido sulfúrico para hacer soluciones con la concentración de cromo que se necesita (10–80 μg). Variar las proporciones de agua y ácido para llegar a la molaridad de ácido sulfúrico de las muestras (paso 4);

  8. Leer la absorbencia a 350 nm de longitud de onda en el espectrofotómetro;

  9. Preparar un gráfico usando papel semilogarítmico. Usar el lado de logaritmo para la absorbencia.

9.5.4 Determinación del óxido crómico

  1. Pesar 0.1 g de la muestra (pienso y heces);

  2. Agregar 15 cm3 de la solución digestiva;

  3. Dejar reposar durante 12 h;

  4. Colocar los matraces en la parrilla eléctrica caliente (400–450°C). El color oscuro cambia a verde claro después 1 h;

  5. Revolver los matraces para lavar las paredes. con esto cambia de color verde a naranja o amarillo en 30';

  6. Hervir los matraces por lo menos durante 15' después de haber cambiado a color amarillo;

  7. Enfriar los matraces y traspasar el contenido a matraces de aforo de 100 cm3 completando con agua destilada;

  8. Preparar un blanco, con todos los reactivos pero sin muestra;

  9. Leer la absorbencia de las muestras y el blanco, a 350 nm de longitud de onda, en el espectrofotómetro;

  10. Para obtener los valores verdaderos se les resta la lectura del blanco a las muestras;

  11. Se compara la lectura con una curva estándar.

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