Por:
Juan Antonio Manríquez H.
Fundación Chile
Medir la absorción de nutrientes por el aumento de la concentración de un marcador indigestible entre alimento y heces; estas últimas pueden recolectarse aleatoriamente, sin necesitar hacerse una recolección total.
Etapas:
Recepción de la muestra (alimento comercial o insumo).
Preparación del pienso experimental semi-húmedo y del control.
Evaluación de los piensos con trucha arcoiris.
Análisis químico de piensos y material fecal.
1. | Caseína; | 2. | Gelatina; | 3. | Dextrina; |
4. | Aceite de pescado; | 5. | Cloruro de colina; | 6. | Mezcla vitamínica; |
7. | Mezcla de minerales; | 8. | Alfa celulosa; | 9. | Carboximetilcelulosa; |
10. | Oxido crómico; | 11. | Molino; | 12. | Mezcladora; |
13. | Prensadora; | 14. | Congelador; | 15. | Balanza; |
16. | Espátula; | 17. | Cuchillo; | 18. | Mechero. |
1 | Llegada de muestras; | 2. | Molienda de muestras; |
3. | Mezcla de muestras con óxido crómico; | 4. | Disolución de la gelatina; |
5. | Mezcla de gelatina con insumos; | 6. | Elaboración de “tallarines”; |
7. | Corte de “tallarines”; | 8. | Mantención de alimento congelado. |
1. | Llegada de muestras; | 2. | Mezcla de muestras con otros ingredientes (excluida la gelatina); |
3. | Molienda de la mezcla; | 4. | Disolución de la gelatina |
5. | Mezcla de la gelatina con insumos; | 6. | Elaboración de “tallarines”; |
7. | Corte de “tallarines”; | 8. | Mantención de alimento congelado. |
1. | Mezcla de ingredientes (excluida la gelatina); | 2. | Molienda de la mezcla; |
3. | Disolver gelatina; | 4. | Mezclar gelatina con insumos; |
5. | Elaboración de “tallarines”; | 6. | Corte de“tallarines”; |
7. | Mantención de alimento congelado. |
1. | Estanques tipo “Cho”; | 2. | Sistema de circulación de agua (sin cloro), con flujo controlable; |
3. | Doce kilogramos de trucha arcoiris (20 g c/u); | 4. | Tubos de centrífuga; |
5. | Centrífuga; | 6. | Balanza; |
7. | Estufa; | 8. | Congelador. |
Aclimatar truchas de 20 g a estanques e ingesta de óxido crómico (2 semanas);
Mantener 4 kg de trucha aclimatadas en cada estanque;
Alimentar por 3 días con alimento a analizar, para acostumbramiento;
Alimentar por 4 días para análisis (2% peso vivo diario);
Limpiar estanques y tubos de decantación antes de retirarse en la tarde;
Recolectar muestras del material fecal en la mañana.
1. | Calibrar tubos de centrífuga; | 2. | Centrifugar muestras: 1,200 g por 20'; |
3. | Eliminar sobrenadante; | 4. | Secar muestras a 50°C por 24 h; |
5. | Conservar muestras secas congelas hasta análisis químico. |
Molibdato de sodio - 2 agua (Na2MoO4·2H2O);
Acido sulfúrico concentrado (H2SO4);
Acido perclórico 60% (HClO4);
Oxido crómico (Cr2O3);
Dicromato de potasio (K2Cr2O7);
Espectrofotómetro;
Matraces Erlermeyer de 100 cm3;
Matraces de aforo de 100 cm3;
Plancha calefactora.
Disolver 20 g de molibdato de sodio en 300 cm3 de agua destilada;
Añadir lentamente 300 cm3 de ácido sulfúrico concentrado;
Enfriar la mezcla;
Agregar 400 cm3 de ácido perclórico 60%.
Poner a digerir varias muestras diferentes de alimentos y heces;
Diluir hasta 100 cm3 con agua destilada;
Titular con una solución tipo hidróxido de sodio;
Determinar la molaridad media;
Hacer una solución patrón de agua destilada y dicromato de potasio. Usar 0.283 g por litro;
Sacar varias alicuotas;
Diluir con agua destilada y ácido sulfúrico para hacer soluciones con la concentración de cromo que se necesita (10–80 μg). Variar las proporciones de agua y ácido para llegar a la molaridad de ácido sulfúrico de las muestras (paso 4);
Leer la absorbencia a 350 nm de longitud de onda en el espectrofotómetro;
Preparar un gráfico usando papel semilogarítmico. Usar el lado de logaritmo para la absorbencia.
Pesar 0.1 g de la muestra (pienso y heces);
Agregar 15 cm3 de la solución digestiva;
Dejar reposar durante 12 h;
Colocar los matraces en la parrilla eléctrica caliente (400–450°C). El color oscuro cambia a verde claro después 1 h;
Revolver los matraces para lavar las paredes. con esto cambia de color verde a naranja o amarillo en 30';
Hervir los matraces por lo menos durante 15' después de haber cambiado a color amarillo;
Enfriar los matraces y traspasar el contenido a matraces de aforo de 100 cm3 completando con agua destilada;
Preparar un blanco, con todos los reactivos pero sin muestra;
Leer la absorbencia de las muestras y el blanco, a 350 nm de longitud de onda, en el espectrofotómetro;
Para obtener los valores verdaderos se les resta la lectura del blanco a las muestras;
Se compara la lectura con una curva estándar.