El líquido de Bouin no es recomendado como un agente de fijación
para este método debido a que ocasiona una hidrólisis excesiva. La
duración óptima del ácido varía con los agentes de fijación utilizados.
- Desparafinado y lavado de agua destilada.
- Enjuagar rápidamente en NHCl frío y transferir a NHCl a 60°C
para obtener un tejido óptimo (ver más abajo). Nota: Las
secciones deberán estar firmemente unidas a los portaobjetos
con una sustancia adhesiva de otra forma podrían ocurrir pérdidas
debido al HCl (ácido clorhídrico).
- Colocar una sección de control en agua destilada a 60°C por la
misma cantidad de tiempo.
- Lavar las secciones en agua destilada.
- Colocar en reactivo de Schiff por 30–60 minutos.
- Enjuagar rápida y profundamente en agua destilada.
- Lavar en agua corriente.
- Teñir en solución acuosa de verde brillante al 1% durante 1 minuto.
- Deshidratar en alcohol, aclarar en xileno.
- Montar en un medio de resina sintética.
Resultados:
DMA: rojo; Citoplasma: verde.
NOTA: La sección de control deberá ser negativa. Cualquier reacción
positiva indica que hay presentes aldehidos libres antes de la hidrólisis.
Este método resulta particularmente útil para la demostración de
linfocitos debido a la gran cantidad de DNA intracelular precente en
estas condiciones.
Tiempos óptimos de hidrólisis luego de la fijación utilizando
1 N ácido clorhídrico a 60°C.
Formalina 8 minutos
Helly 8 minutos
Susa 18 minutos
Zenker 5 minutos
