6. Trypanosomose animale

(a) Relevés et répartition

Des études ont été entreprises afin d'évaluer la vulnérabilité de jeunes chiens locaux à une infection à Trypanosoma congolense. Six chiots âgés de 7 semaines ont été utilisés pour l'étude. Bien que les chiots soient devenus parasitémiques 6 à 7 jours après l'infection, ils étaient tolérants à l'infection puisque la parasitémie restait faible au cours des sept premières semaines de la période d'observation de huit semaines. L'hématocrite diminuait légèrement seulement au cours des quatre dernières semaines alors que le poids corporel moyen continuait à augmenter. De même, la température corporelle quotidienne moyenne ne différait pas significativement de celle des témoins non infectés. La signification de la trypanotolérance chez les chiens nigérians locaux est discutée.

La prévalence de la trypanosomose chez les bovins commercialisés à l'abattage à Kaduna a été étudiée au cours du pic de la saison des pluies (juillet à septembre 1999). Au total, 500 échantillons de sang ont été prélevés et examinés par la méthode parasitologique en utilisant les techniques de centrifugation de l'hématocrite et de la couche leucocytaire. Un examen physique des animaux a été effectué avant et après l'abattage afin d'évaluer leur état clinique. Le taux d'infection global était de 3,8 pour cent. Toutefois, 30,9 pour cent des animaux présentaient une émaciation grave. Le taux d'infection chez les animaux émaciés (7,6 pour cent) était plus élevé que chez les animaux non émaciés (2,1 pour cent). Les bovins infectés présentaient également des valeurs d'hématocrite significativement plus faibles que les bovins non infectés. La prévalence de la trypanosomose observée dans cette étude ne reflète pas la situation véritable de la maladie dans l'État de Kaduna. Ces résultats indiquent toutefois que la trypanosomose a un impact sur l'état physique des bovins à l'abattage et, par conséquent, sur leur valeur commerciale.

La prévalence des trypanosomes chez les bovins a été estimée en août 2001 dans des exploitations sélectionnées de trois districts de la zone de gouvernement local de Lere, dans l'État de Kaduna, dans le centre nord du Nigéria. L'étude a été effectuée suite à des rapports de résurgences de trypanosomose, résultant en des morts de bovins, ce qui a entraîné la migration précoce des Peuls semi-nomades hors de la zone, en particulier au cours de la saison des pluies. Des échantillons de sang prélevés de façon aléatoire chez 526 bovins ont été examinés pour les trypanosomes en utilisant la technique de la couche leucocytaire et des frottis minces avec une coloration de Giemsa. Au total, 48 animaux se sont avérés infectés: 39 (81 pour cent) avec Trypanosoma vivax, 7 (15 pour cent) avec T. congolense et 2 (4 pour cent) avec T. brucei. Les taux d'infection chez les jeunes bovins et les bovins adultes étaient de 6 et de 10 pour cent, respectivement, et n'étaient donc pas significativement différents. D'après cette étude, il est clair que la trypanosomose reste un obstacle majeur à la production animale au Nigéria et que le taux d'incidence est similaire chez les jeunes animaux et les animaux adultes.

Des enquêtes sur la trypanosomose ont été effectuées au cours d'une période de quatre années consécutives dans une zone infestée par les glossines et dans une zone exempte de glossines dans la Région d'Amhara, dans le nord-ouest de l'Éthiopie. Dans chaque zone d'étude, des bovins communautaires sélectionnés de façon aléatoire ont fait l'objet d'un échantillonnage et leur sang a été examiné au moyen de méthodes de diagnostic parasitologique. Simultanément, la population de mouches piqueuses a fait l'objet d'un échantillonnage. La prévalence mensuelle moyenne des infections trypanosomiennes chez les bovins ne différait pas significativement entre les zones d'étude. Dans les deux zones d'étude, la prévalence des infections trypanosomiennes était la plus élevée au cours de la longue saison des pluies. Les infections trypanosomiennes étaient principalement dues à Trypanosoma vivax et elles réduisaient significativement l'hématocrite moyen et l'état corporel des animaux. La prévalence mensuelle de l'infection était en corrélation avec la densité de mouches piqueuses, telles que les Tabanidae et Stomoxys spp., au cours du mois précédent, ce qui suggère que la transmission mécanique joue un rôle important dans l'épidémiologie de la trypanosomose dans ces deux zones.

Une étude a été effectuée dans deux vallées du sud-ouest de l'Éthiopie (vallées de Didessa et de Ghibe) de novembre 2002 à avril 2003 afin de recueillir des données de référence sur la prévalence de la trypanosomose chez les races locales d'ovins et de caprins. Des échantillons de sang ont été prélevés chez 533 petits ruminants d'espèces, de sexes et de classes d'âge différents, sélectionnés de façon aléatoire, et examinés au moyen des techniques hématologiques et parasitologiques conventionnelles. Parmi les petits ruminants examinés au cours de la période d'étude, 27 (5,1 pour cent) étaient infectés avec des trypanosomes. La majeure partie des infections chez les ovins et les caprins, respectivement, était due à Trypanosoma congolense (46,7 pour cent, 33,3 pour cent) suivi par T. vivax (26,7 pour cent, 25,0 pour cent) et le reste était dû à T. brucei (6,7 pour cent, 8,3 pour cent) et à des infections mixtes à T. congolense et T. vivax (13,3 pour cent, 25,0 pour cent), et à T. brucei et T. vivax (6,7 pour cent, 8,3 pour cent). Il n'y avait pas de différence statistiquement significative de l'infection entre les mâles et les femelles, entre les classes d'âges chez les ovins et les caprins ni entre les vallées. Il existait une différence significative du taux d'infection entre les ovins et les caprins, le taux plus élevé étant de 7,7 pour cent chez les ovins et le plus faible de 3,6 pour cent chez les caprins. La valeur moyenne de l'hématocrite des animaux parasitémiques était significativement plus faible que celle des animaux aparasitémiques. Pour essayer d'identifier les vecteurs impliqués dans la transmission de la trypanosomose chez les petits ruminants, des glossines du groupe morsitans (Glossina pallidipes et G. morsitans submorsitans) et du groupe palpalis (G. fuscipes fuscipes) ainsi que des vecteurs mécaniques de la trypanosomose appartenant à la famille des Tabanidae (Tabanus) ont été capturés dans les bas-fonds de Didessa (à une altitude de 1400 à 1780 m au-dessus du niveau de la mer) et dans les vallées de Ghibe (à une altitude de 1250 à 1700 m au-dessus du niveau de la mer). L'étude a révélé que la trypanosomose chez les ovins et les caprins est une maladie importante et que les petits ruminants servent de réservoir potentiel de l'infection pour d'autres animaux.

Une enquête pilote, portant sur les connaissances et les attitudes des propriétaires de bovins à l'égard de la lutte contre les glossines et la trypanosomose, a été effectuée au moyen d'un questionnaire structuré dans les districts de Tororo et de Busia en Ouganda afin de comprendre les facteurs qui empêchaient leur pleine participation. Au total, 81 propriétaires de bovins ont été sélectionnés de façon aléatoire et interrogés. 92,5 pour cent d'entre eux étaient au courant des glossines et de la trypanosomose et 87,6 pour cent reconnaissaient que la trypanosomose animale était un problème dans la région. La majorité des propriétaires de bovins étaient au courant du piégeage des glossines (76,5 pour cent), de l'utilisation du chlorure d'isométamidium (55,5 pour cent), de l'utilisation de l'acéturate de diminazène (48 pour cent) et des applications en «pour-on» (18,5 pour cent). Cependant, ces connaissances ne coïncidaient pas avec l'application des mesures de lutte. Malgré la prise de conscience largement répandue, le piégeage des glossines et les applications en «pour-on» n'étaient utilisés que par un petit pourcentage seulement de propriétaires de bovins (7,5 pour cent piégeaient les glossines alors que 76,5 pour cent en étaient conscients; 1,2 pour cent appliquaient des insecticides en «pour-on» alors que 18 pour cent étaient au courant). Les différences entre la prise de conscience et l'application était très significative pour le piégeage des glossines et les applications en «pour-on» mais pas pour l'utilisation de chlorure d'isométamidium et d'acéturate de diminazène. La majorité des propriétaires de bovins (97,5 pour cent) était disposée à participer à des programmes de lutte futurs mais préférait participer sur une base collective (85,2 pour cent) plutôt qu'individuelle (14,8 pour cent). Les quatre options de lutte préférés étaient par ordre d'importance: les pièges à glossines fournis par le gouvernement et entretenus par les propriétaires de bétail; une contribution de main-d'œuvre par les propriétaires de bovins pour déployer les pièges; un autofinancement des médicaments trypanocides et un autofinancement de l'insecticide en «pour-on». Les options de lutte qui devraient être sélectionnées pour obtenir une pleine participation des propriétaires de bovins sont discutées.

Une étude épidémiologique longitudinale sur la trypanosomose bovine et ses vecteurs a été effectuée dans le bassin de la Volta dans le nord du Ghana afin de déterminer le rapport entre la gestion des bovins et l'incidence de la trypanosomose bovine. Deux groupes de bovins sentinelles dans des systèmes de gestion différents, classés en tant que «pleinement sédentaire» et «partiellement sédentaire» ont été suivis pendant une période d'un an à partir de mars 2003. Les bovins ont fait l'objet d'un dépistage tous les trois mois au moyen de la technique de la couche leucocytaire. Les spécimens de couche leucocytaire des animaux testant positifs avec la technique de couche leucocytaire et de ceux testant négatifs mais présentant un hématocrite inférieur à 21 pour cent ont fait l'objet de tests supplémentaires avec une amplification en chaîne par la polymérase. Le plasma de tous les animaux a été testé pour déceler les anticorps au moyen du titrage indirect d'immunosorbants à liaison enzymatique (ELISA). L'exposition à la trypanosomose a été déterminée en tandem avec l'enquête épidémiologique, les points d'abreuvement des bovins sentinelles étant le centre d'intérêt. La prévalence parasitologique au début de l'enquête était plus élevée dans le groupe pleinement sédentaire (9 pour cent) que dans le groupe partiellement sédentaire (3 pour cent). Toutefois, lors des visites ultérieures, l'incidence parasitologique était régulièrement plus élevée dans le groupe partiellement sédentaire que dans le groupe pleinement sédentaire. La séroprévalence (ELISA) moyenne des deux groupes allait de 3 pour cent en mars à 54 pour cent en décembre. Une analyse statistique des résultats sérologiques au moyen d'une régression logistique à effet aléatoire indiquait une différence significative de l'incidence de la trypanosomose bovine entre les deux groupes. L'effet du temps était également significatif. L'influence de la gestion des bovins sur l'interface hôte-vecteur-parasite et ses conséquences sur l'incidence de la trypanosomose sont discutées.

La présente communication présente les résultats d'une étude effectuée dans la Division de Lapur, dans le District de Turkana, au Kenya, afin d'estimer l'incidence et la mortalité de la trypanosomose chez les dromadaires à l'aide de méthodes participatives. Quatre campements de bétail («adakars») ont été sélectionnés pour l'étude. Quatre groupes d'informateurs comprenant 6 à 8 personnes-clés ont été utilisés pour les exercices en participation. Les maladies des dromadaires identifiées par les pastoralistes par ordre d'importance selon l'incidence annuelle étaient: la trypanosomose (11,4 pour cent); la gale (10,8 pour cent); l'infestation par les tiques (7,9 pour cent); la septicémie hémorragique (7,7 pour cent); et la diarrhée non spécifique (7,6 pour cent). Presque la moitié (49,3 pour cent) de la population des dromadaires souffrait d'au moins une maladie l'année précédente. L'incidence annuelle et les taux de mortalité de la trypanosomose étaient estimés à 15 pour cent et 9,9 pour cent chez les dromadaires adultes et à 6,9 pour cent et 5,2 pour cent chez les jeunes dromadaires, respectivement. Il existait une présence saisonnière de la trypanosomose, la plupart des cas étant signalés pendant la saison sèche. Les niveaux de prévalence de la maladie auraient diminué de 100 pour cent en 1978 à une situation presque stable de 15 pour cent en 2002. La présente étude a révélé que la trypanosomose chez les dromadaires reste une maladie importante dans le District de Turkana, ayant de lourdes conséquences en termes de morbidité et de mortalité. Il est probable que les pertes économiques dues à la maladie aient été élevées à cause du rôle crucial que les dromadaires jouent dans ce district aride du Kenya.

Il existe 11 trypanosomes pathogènes différents dans les régions d'Afrique où la trypanosomose est endémique. Leur détection et leur caractérisation par des méthodes moléculaires repose sur des amorces spécifiques aux espèces; en conséquence, plusieurs tests d'ACP doivent être effectués sur chaque échantillon. Nous avons utilisé ici de nouvelles amorces et les produits de l'ACP ont été évalués pour la spécificité et sensibilité pour une gamme d'espèces de Trypanosoma importantes du point de vue économique et médical. Ces amorces sont prometteuses en tant qu'outil routinier de diagnostic au moyen d'une ACP unique; cependant, une évaluation supplémentaire est recommandée.

L'apparition récente d'anaplasmose dans un troupeau de bovins suisses a déclenché une discussion sur les risques de maladies transmises aux humains et aux animaux par des vecteurs en rapport avec les changements climatiques et à d'autres facteurs. Le présent article présente les activités de l'Institut Tropical Suisse sur les maladies transmises par des vecteurs (paludisme, trypanosomose et leishmaniose chez les humains et maladies transmises par les tiques chez le bétail), décrit les risques potentiels pour les humains et les animaux en Suisse et discute des possibilités d'action dans les domaines de la santé publique, de la production animale et de la garde des animaux de compagnie. La Suisse est de plus en plus confrontée à des maladies transmises aux humains et aux animaux par des vecteurs mais cela est principalement dû à un accroissement des cas importés. L'apparition d'une maladie dans un secteur (médecine humaine ou vétérinaire) peut donner des indications sur des tendances futures possibles dans l'autre secteur. Une intensification de la collaboration entre les organes de santé publique et de médecine vétérinaire est nécessaire au niveau fédéral et cantonal.

(b) Pathologie et immunologie

[Cf. aussi 28: 13162]

L'effet de la trypanosomose caprine aiguë sur la concentration des électrolytes dans l'hémoglobine, l'urée et le sérum a été étudié chez des caprins Red Sokoto infectés à Trypanosoma vivax. Le cours de l'infection ne durait que deux semaines lorsque les caprins infectés mouraient d'une parasitémie fulminante et d'une fièvre élevée. La concentration de l'hémoglobine chez les caprins infectés était lègèrement réduite seulement. Cependant, le niveau d'urée dans le sérum était significativement accru alors que les niveaux de Cl, de K⁺, et d'HCO₃ étaient légèrement accrus deux semaines après l'infection par rapport aux valeurs avant l'infection. Le Na⁺ du sérum augmentait seulement au cours de la première semaine suivant l'infection mais retrouvait les valeurs avant l'infection la deuxième semaine.

L'effet de la trypanosomose sur les concentrations de stéroïdes dans le plasma et les caractéristiques du sperme a été étudié chez 24 dromadaires mâles. Sur la base du diagnostic parasitologique et sérologique, 18 dromadaires mâles se sont avérés infectés à Trypanosoma evansi (Groupe 2) et six s'avéraient exempts d'une infection et servaient de témoins (Groupe 1). Les animaux infectés présentaient des symptômes d'anémie indiqués par la diminution de l'hématocrite et de la concentration de l'hémoglobine (Hb), des membranes muqueuses pâles, une perte de poids, une léthargie, une faiblesse et un poil terne. Toutefois, cinq animaux (27,8 pour cent) du groupe infecté présentaient des températures rectales élevées et trois animaux (16,7 pour cent), une dégénérescence testiculaire après palpation du contenu de leur scrotum. Les concentrations d'oestradiol-17â dans le plasma (86,5 ± 8,6 pg/ml contre 232,5 ± 74,4 pg/ml) et de testostérone (4,8 ± 0,7 ng/ml contre 2,7 ± 1,5 ng/ml) étaient significativement différentes (P<0,05) entre les mâles témoins et les mâles infectés. Le sperme recueilli par électroéjaculation a été évalué par un analyseur informatisé du mouvement des cellules. Il a révélé des caractéristiques normales du sperme chez les animaux témoins par rapport à des caractéristiques détériorées chez les mâles infectés. Il y avait des diminutions très significatives (P<0,01) du nombre de spermatozoïdes (12,2 ± 1,3/ml contre 6,5 ± 4,9×10⁶ ml^-1), du pourcentage de motilité (68,2 ± 6,7 pour cent contre 27,4 ± 15,6 pour cent), du pourcentage de spermatozoïdes vivants (73,2 ± 8,3 pour cent contre 35,8 ± 8,2 pour cent) et des accroissements du pourcentage d'anomalies morphologiques (3,3 ± 0,6 pour cent contre 15,9 ± 1,0 pour cent) dans le groupe infecté. Un examen des profils hormonaux du plasma et des caractéristiques du sperme chez les mâles infectés a indiqué qu'une altération de la fonction des cellules de Sertoli due à la formation de complexes immunitaires chez quatre mâles (Groupe 2A), un dysfonctionnement pituitaire chez six mâles (Groupe 2B), une dégénérescence testiculaire chez trois mâles (Groupe 2C) et finalement une trypanotolérance chez cinq mâles (Groupe 2D) sont des facteurs pouvant être responsables des caractéristiques médiocres du sperme et de l'infertilité causée par une infection à T. evansi chez les dromadaires mâles.

Des modèles animaux de trypanosomose humaine africaine (THA) ont été mis au point pour comprendre les mécanismes pathogènes qui conduisent au passage à la phase neurologique et la plupart d'entre eux ont trait aux aspects histologiques mais pas aux données cliniques ou sur le comportement. Notre étude visait à définir des marqueurs cliniques et/ou de comportement simples du passage de la phase hémolymphatique à la phase méningo-encéphalitique de la maladie. Des rats Sprague-Dawley (n = 24) ont été infectés avec Trypanosoma brucei brucei AnTat 1.1E. L'ingestion alimentaire et le poids corporel ont été mesurés quotidiennement à partir du jour de l'infection jusqu'à la mort. L'hématocrite était mesuré deux fois par semaine. Les troubles du comportement ont été évalués au moyen d'un essai sur le terrain. Une perte de poids soudaine se produisait le douzième jour après l'infection à cause d'une baisse significative de l'ingestion alimentaire commençant deux jours plus tôt. Les rats développaient un état anémique indiqué par les mesures de l'hématocrite. L'essai sur le terrain montrait qu'ils étaient moins actifs et réagissaient moins dès la deuxième semaine suivant l'infection. Une étude histologique complémentaire a permis d'observer des trypanosomes et des cellules inflammatoires dans le plexus choroïde pendant la même période. Ces résultats suggèrent des troubles fonctionnels du système nerveux central. La perte de poids observée est discutée en tant que mesure de l'entrée dans la phase méningo-encéphalitique. Le modèle de rat reproduit les symptômes neurologiques observés dans la maladie humaine et peut s'avérer utile pour des études neurohistologiques et thérapeutiques ultérieures.

Les paramètres sanguins de 23 bovins Muturu dans un troupeau ont été étudiés entre avril et août 1998 au cours d'examens mensuels d'échantillons de sang. Quatorze des 110 échantillons sanguins totaux analysés (cinq échantillons ne convenaient pas à l'analyse) étaient infectés avec Trypanosoma vivax. Les données du sang infecté par les trypanosomes ont été incluses pour évaluer le rôle d'une infection trypanosomienne. Les valeurs sanguines des animaux infectés étaient indifférenciables de celles des animaux non infectés, si ce n'est pour les indices érythrocytaires de l'hémoglobine moyenne érythrocytaire et de la concentration hémoglobinique érythrocytaire. Il y avait des variations dues à l'âge et à l'état physiologique (, gravide et allaitant). Le nombre moyen d'érythrocytes et de leucocytes, le volume globulaire moyen et le nombre de monocytes étaient plus faibles chez les veaux que chez les animaux plus âgés. Les vaches non gravides présentaient un nombre moyen d'érythrocytes et de monocytes plus élevé et un nombre de leucocytes, un volume globulaire moyen et une hémoglobine moyenne érythrocytaire plus faibles que les vaches gravides et allaitant.

(c) Trypanotolérance

[Cf. aussi 28: 13117, 13147]

Un aperçu de la nature du problème causé par les glossines et la trypanosomose en Afrique et les options variées dont on dispose pour la lutte sont fournis. Les principes de base sont décrits pour le rôle du bétail trypanotolérant au sein d'une approche intégrée visant à combattre le problème des glossines et de la trypanosomose. Ils devraient permettre une meilleure compréhension des endroits et des moments où le bétail trypanotolérant pourrait être utilisé de façon économique et durable pour lutter contre le problème des glossines et de la trypanosomose. L'importance des attitudes des propriétaires de bétail est prise en considération.

Les interactions de la trypanosomose et du niveau de nutrition sur la santé et la productivité de chèvres naines d'Afrique de l'Ouest multipares et primipares ont été étudiées dans une expérience multifactorielle incluant le régime alimentaire (supplémentation ou régime de base) et l'infection (animal infecté ou témoin). Les chèvres de l'expérience ont été infectées avec Trypanosoma congolense au début de la deuxième semaine suivant le chevrotage et surveillées pendant 16 semaines après l'infection. L'infection trypanosomienne réduisait significativement l'hématocrite. Indépendamment de l'infection, la chute de l'hématocrite à partir de la période précédant l'infection jusqu'à la fin de l'expérience était plus grave chez les animaux recevant un régime alimentaire restreint. La parasitémie trypanosomienne avait tendance à être plus élevée dans le groupe recevant une supplémentation que dans le groupe recevant un régime alimentaire de base et les animaux multipares présentaient une parasitémie plus élevée que les animaux primipares. L'infection trypanosomienne ainsi que la supplémentation avait un effet significatif sur la durée de la lactation. Le prélèvement de lait chez les chèvres infectées avec des trypanosomes était significativement plus bas que chez le groupe témoin non infecté et le niveau de nutrition avait un effet positif. La chute du prélèvement de lait due à une infection trypanosomienne était plus grave dans le groupe qui recevait une supplémentation que dans le groupe recevant un régime alimentaire de base, à cause du nombre de chèvres du groupe recevant une supplémentation qui étaient retirées de l'expérience. L'effet d'une infection trypanosomienne sur le poids vif des chèvres n'était évident qu'au cours des huit premières semaines de lactation et il n'y avait aucun effet significatif sur le taux de croissance de leur progéniture à moins que la mère meure. Les concentrations de protéines totales, d'albumine et de cholestérol dans le plasma étaient significativement réduites par l'infection mais significativement accrues par la supplémentation. Les chèvres recevant une supplémentation présentaient un niveau de cholestérol plus élevé et une tendance à une parasitémie plus élevée. Les chèvres multipares avaient également un niveau de cholestérol plus élevé que les chèvres primipares et, sur la base du nombre d'animaux retirés de l'expérience, elles présentaient une résistance plus faible à l'infection.

Une analyse génétique de la variation des microsatellites dans 16 populations de bovins d'Afrique de l'Ouest a été effectuée. L'Afrique de l'Ouest représentait une juxtaposition unique de différentes zones climatiques et écologiques dans une région géographique relativement petite. Alors que la glossine, un vecteur transmettant la trypanosomose chez les bovins, habitait les régions côtières plus humides, la maladie n'était pas transmise dans les zones plus arides à l'extérieur de cette zone. Il s'agissait de l'étude la plus approfondie de la diversité génétique chez les bovins dans cette zone, qui contenait des races bovines trypanotolérantes importantes du point de vue génétique. Les rapports génétiques entre les nombreuses races ont été examinés et les niveaux de diversité évalués. Les niveaux de mélange ont été déterminés à l'aide d'une variété de méthodes. Des allèles donnant une information sur l'ascendance ou associés à une population ont été sélectionnés en utilisant des populations provenant d'Inde, du Proche Orient et d'Europe. Une analyse multivariée, le programme «admix» et des approches d'analyse bayésienne du mélange basée sur un modèle ont également été utilisés. Ces analyses ont indiqué l'impact direct des facteurs écologiques et l'effet profond du mélange sur les bovins de cette région. Les résultats ont également mis en évidence l'importance des efforts visant à éviter une dilution supplémentaire des races taurines africaines par les bovins zébu.

La trypanosomose bovine africaine, causée par le parasite protozoaire Trypanosoma congolense, est endémique en Afrique subsaharienne et est une contrainte majeure à la production animale. Une approche prometteuse à la lutte contre la maladie est de comprendre et d'exploiter la trypanotolérance qui a évolué naturellement. Nous décrivons la première tentative d'étude de la réponse transcriptionnelle des bovins Boran (Bos indicus) sensibles à une infection trypanosomienne par le biais d'une approche de génomique fonctionnelle utilisant une plateforme de microréseau de cADN de leucocytes totaux bovins. Quatre bovins Boran mâles ont été infectés expérimentalement avec T. congolense et des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) ont été recueillies avant l'infection et 13, 17, 23 et 30 jours après l'infection. Un modèle expérimental de référence a été employé utilisant une banque universelle de référence d'ARN bovin. Les données ont été normalisées à la valeur médiane d'un ensemble de gènes invariables (GAPDH) et des outils de réseau BRB ont été utilisés pour chercher des gènes exprimés différentiellement, significatifs du point de vue statistique entre chaque point dans le temps. En utilisant un jeu de 20 hybridations de microréseau, nous avons contribué significativement à comprendre la réponse transcriptionnelle temporelle des PBMC bovines in vivo à une infection trypanosomienne contrôlée. Les changements les plus grands étaient évidents 13 jours après l'infection après que des parasites aient été détectées pour la première fois dans le sang. Des différences significatives ont été observées dans des grappes de sous-unités de kinase C de protéine et des molécules MHC de catégorie I/II apparentées.

(d) Traitement

[Cf. aussi 28: 13135]

7. Trypanosomose expérimentale

(a) Diagnostics

Alors que l'ACP est la méthode préférée pour détecter les trypanosomes africains à la fois chez les humains et les animaux, le coût élevé de cette méthode empêche son utilisation en tant qu'outil de diagnostic pour la détection d'une trypanosomose endémique dans les pays d'Afrique. La réaction d'amplification isotherme facilitée par l'anneau (LAMP) est une méthode qui amplifie l'ADN avec une grande spécificité, efficacité et rapidité dans des conditions isothermes au moyen d'étuves d'incubation simples. Un avantage supplémentaire de cette réaction par rapport aux méthodes basées sur l'ACP est le fait que l'amplification de l'ADN peut être surveillée de façon spectrophotométrique et/ou à l'œil nu sans utiliser de teintures. Nous faisons rapport ici de nos conditions pour un essai de diagnostic très sensible, spécifique et facile basé sur la technologie de LAMP pour la détection de parasites dans le groupe Trypanosoma brucei (y compris T. brucei brucei, T. brucei gambiense, T. brucei rhodesiense, et T. evansi) et T. congolense. Nous montrons que la sensibilité de la méthode basée sur la technologie de LAMP pour la détection des trypanosomes in vitro est jusqu'à 100 fois plus grande que celle des méthodes basées sur une ACP. Des études in vivo chez des souris infectées avec T. brucei gambiense pathogène pour les humains mettent en évidence l'importance clinique potentielle de la technologie LAMP en tant qu'outil de diagnostic pour l'identification de la trypanosomose africaine.

(b) Pathologie et immunologie

[Cf. aussi 28: 13187]

Bien que la trypanosomose humaine africaine constitue actuellement un problème socioéconomique majeur dans plusieurs parties de l'Afrique subsaharienne, des rapports contradictoires sur les infections expérimentales paraissent être un des facteurs limitant la lutte chimiothérapeutique contre la maladie. Une tentative a, par conséquent, été faite pour évaluer l'effet de deux souches de Trypanosoma brucei gambiense sur les protéines totales et les autres paramètres biochimiques du sérum en utilisant des singes vervet comme modèle. L'impact des deux souches sur les singes vervet a été traumatisant puisque les singes sont morts de l'infection 12 à 15 semaines après l'infection alors que les protéines du sérum augmentaient à cause d'un accroissement des globulines dans le sérum avec la chute de la proportion d'albumine/globuline en résultant. De même, les niveaux de créatinine et de fibrinogène s'accroissaient avec l'infection. L'étude confirme l'existence d'infections virulentes atypiques résultant en une mort précoce due à T. b. gambiense.

Les patients atteints de trypanosomose humaine africaine (maladie du sommeil), causée par l'inoculation de Trypanosoma brucei gambiense ou de T. b. rhodesiense, présentent une perturbation de la répartition du sommeil et de la veille sur 24 heures, accompagnée par la présence d'épisodes de sommeil avec mouvements oculaires rapides au début du sommeil, proportionnelle à la gravité de la maladie. Bien que des modèles animaux de la trypanosomose humaine africaine aient été mis au point pour comprendre les mécanismes pathogènes conduisant à des altérations du système immunitaire, le développement d'un modèle animal comprenant les altérations des rythmes biologiques endogènes reste nécessaire. Suite à la description des interventions et des expériences sur un rat infecté avec T. b. brucei, nous concluons que le rat infecté avec Trypanosoma brucei brucei est un bon modèle du syndrome observé dans la trypanosomose humaine africaine, c'est-à-dire de la perturbation du cycle de sommeil-veille de 24 heures et de la présence d'épisodes de type mouvements oculaires rapides au début du sommeil.

Trente-six caprins nains d'Afrique de l'Ouest ont été utilisés pour évaluer les effets d'une infection expérimentale à Trypanosoma congolense sur leur système reproductif. Les cycles œstraux ont été synchronisés et, lorsque leur gravidité a été confirmée (n = 31), les chèvres ont été réparties de façon aléatoire dans des groupes témoins et des groupes infectés avec des trypanosomes. Après l'infection, les animaux ont fait l'objet d'observations soigneuses jusqu'au chevrotage. L'infection trypanosomienne causait un accroissement de la température rectale, une chute significative de l'hématocrite et des avortements chez 27,8 pour cent des chèvres infectées. Les chevreaux de mères infectées avaient un poids à la naissance plus faible que ceux de mères témoins. Huit des 13 chevreaux (61,5 pour cent) nés vivants de mères infectées mouraient au cours de la première semaine. Les concentrations dans le plasma de glycoprotéines associées à la gravidité (PAG) et de progestérone étaient plus faibles chez les animaux infectés que chez les animaux témoins. En général, les concentrations de PAG chez les chèvres qui avortaient chutaient avant l'avortement. Nos résultats ont révélé qu'une infection expérimentale à T. congolense affectait la performance de reproduction des caprins nains d'Afrique de l'Ouest, des avortements, des naissances prématurées et des pertes périnatales étant observés. Ni une transmission transplacentaire de T. congolense ni des lésions histopathologiques du placenta n'ont pu être démontrées.

Les manifestations neurologiques de la maladie du sommeil chez les humains sont attribuées à la pénétration de la barrière hématoméningée et à l'invasion du système nerveux central par Trypanosoma brucei gambiense et Trypanosoma brucei rhodesiense. Toutefois, la façon dont les trypanosomes africains traversent la barrière hématoméningée reste un problème non résolu. Nous avons examiné la pénétration de la barrière hématoméningée par des trypanosomes africains au moyen d'un modèle in vitro de barrière hématoméningée composé de cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain cultivées sur des plaques Costar Transwell. La souche T. b. gambiense IL 1852 pathogène pour les humains s'avérait traverser les cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain beaucoup plus facilement que les souches T. b. brucei 427 et TREU 927 pathogènes pour les animaux. Les trypomastigotes procycliques pathogènes pour les glossines ne traversaient pas les cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain seules ou incubées avec la forme sanguine de T. b. gambiense. Après une incubation d'une nuit, l'intégrité de la couche monomoléculaire de cellules endothéliales microvasculaires du cerveau humain mesurée par la résistance électrique transendothéliale était maintenue sur les plaques par rapport aux témoins lorsque les cellules endothéliales étaient incubées avec T. b. brucei. Cependant, des réductions de la résistance électrique ont été observées lors les plaques recouvertes de cellules endothéliales microvasculaires du cerveau étaient incubées avec T. b. gambiense. Des études au microscope optique et électronique ont révélé que T. b. gambiense se lie initialement aux ou près des jonctions intercellulaires avant de traverser la barrière hématoméningée par voie paracellulaire. C'est la première fois que la pénétration paracellulaire de la barrière hématoméningée par des trypanosomes africains est démontrée. Des études supplémentaires sont nécessaires pour déterminer le mécanisme de la pénétration de la barrière hématoméningée par ces parasites au niveau cellulaire et moléculaire.

La présente étude a été effectuée pour évaluer les effets combinés de la supplémentation de vitamine E et de sélénium dans l'alimentation sur les leucocytes totaux, les cellules mononucléées, les cellules polymorphonucléées et l'hématocrite de rats (Rattus rattus) infectés à Trypanosoma congolense. Quatre-vingt dix R. rattus adultes ont été utilisés. Les rats ont été répartis de façon aléatoire dans 6 groupes de traitement (A à F). Chaque traitement a été répliqué trois fois. Les rats recevait une alimentation basée sur de la pâtée pour volaille contenant des quantités variées de vitamine E et de sélénium. Dans le traitement A, le groupe témoin, ni de la vitamine E ni du sélénium n'ont été incorporés dans l'alimentation et, dans les autres traitements (B à F), la pâtée pour volaille contenait différents niveaux de vitamine E et de sélénium, à savoir régime alimentaire B: 0,1 mg de sélénium et 60 mg de vitamine E; régime alimentaire C: 0,3 mg de sélénium et 80 mg de vitamine E; régime alimentaire D: 0,5 mg de sélénium et 100 mg de vitamine E; régime alimentaire E: 0,3 mg de sélénium et 0,0 mg de vitamine E; et régime alimentaire F: 0,0 mg de sélénium et 80 mg de vitamine E. Des échantillons de sang ont été prélevés toutes les semaines chez les rats de chaque traitement. L'expérience a duré cinq semaines et, à la fin de celle-ci, on a trouvé que le régime alimentaire C comportant 0,3 mg de sélenium et 80 mg de vitamine E accroissait significativement (P<0,05) la résistance de R. rattus à la trypanosomose; les rats vivaient au-delà des 10 à 20 jours habituels après avoir été infectés avec T. congolense.

Le développement d'une anémie dans les maladies inflammatoires est facilité par la cytokine. Spécifiquement, les niveaux du facteur de nécrose tumorale a (TNF-a) produit par les macrophages activés, sont corrélés à la gravité de la maladie et de l'anémie dams des infections et maladies chroniques. Dans la trypanosomose africaine, une anémie se développe très tôt au cours de l'infection, au moment où les parasites deviennent décelables dans le sang. Puisque l'anémie persiste après les premières vagues de parasitémie lorsque de faibles nombres de trypanosomes circulent dans le sang, on suppose généralement que l'anémie n'est pas induite directement par un facteur du parasite mais pourrait être facilitée par la cytokine comme dans d'autres cas d'anémie accompagnant une inflammation. Pour tirer au clair le rôle de TNF-a dans le développement de l'anémie, les paramètres sanguins de souris trypanotolérantes de type sauvage (TNF-a^+/+), de souris sans TNF-a (TNF-a^-/-) et de souris hémizygotes avec TNF-a (TNF-a^-/+) ont été comparés au cours d'infections avec le parasite des bovins Trypanosoma congolense. Aucune différence au niveau de l'hématocrite, du nombre d'érythrocytes ou de l'hémoglobine n'a été observée entre les souris dépourvues de TNF-a et les souris de type sauvage, ce qui suggère que la diminution des érythrocytes n'était pas facilitée par TNF-a. Les niveaux d'érythropoetine (EPO) augmentaient pendant l'infection et aucune différence significative des niveaux d'EPO n'était observée entre les trois souches de souris. Par contre, au cours d'une infection avec le pathogène pour les humains Trypanosoma brucei rhodesiense, le nombre d'érythrocytes chez les souris dépourvues de TNF-a restait significativement plus élevé que chez les souris de type sauvage. Ces données suggèrent que plus d'un mécanisme favorise le développement d'une anémie associée à la trypanosomose.

(c) Chimiothérapie

La stabilité chimique du trypanocide bérénil a été évaluée pour une gamme de pH de 1 à 8 à 37°C et à une force ionique de 0,2 M. Il a été trouvé suffisamment instable dans des conditions acides pour que son efficacité thérapeutique soit très probablement gravement compromise lorsqu'il est administré par voie orale. A un pH de 3, la demi-vie était de 35 minutes, passant à 1,5 min à un pH de 1,75. Les constantes de la vitesse de réaction ont été corrigées pour les effets de la catalyse tampon et se sont avérées aller de 2,00 min^-1 à un pH d'1 à 6,1 × 10^-6 min^-1 à un pH de 8. Le profil de la vitesse de pH affichait une région (pH de 1 à 4) où une catalyse acide spécifique était dominante, suivie par une région transitionnelle (pH de 5 à 7), et finalement par une région (pH>7) où la dégradation non catalysée était la plus importante. Il est recommandé de recouvrir le bérénil d'un revêtement résistant à l'acide intestinal pour les formulations utilisées pour traiter les maladies parasitaires dans le Tiers Monde.

Les arsénolipides naturels sont des analogues des lipides neutres comme les monoglycérides, les glycolipides, les phospholipides et les phosphonolipides. Ils ont été trouvés dans des microorganismes, des champignons, des végétaux, des lichens, des mollusques marins, des éponges, d'autres invertébrés et dans des poissons. Le présent examen présente les structures des arsénolipides naturels (et de leurs dérivés), leur répartition, leur biogenèse dans les algues et les invertébrés, leur synthèse et aussi leur activité biologique. On pense que les arsénolipides sont les produits terminaux de processus de détoxication des arséniates, impliquant une réduction et une méthylation oxydative et une adénosylation. La biogenèse des arsénolipides proposée est fondée sur la présence naturelle de métabolites d'arsenic et tous les intermédiaires dans le cheminement proposé ont été identifiés comme des produits naturels d'origine algale. Il est démontré que différentes espèces d'arsenic sont des inhibiteurs de la kinase de glycérol, de l'anhydrase carbonique bovine et sont un traitement efficace contre la leucémie promyélocytique aiguë, et une activité prometteuse a été remarquée dans d'autes tumeurs hématologiques et solides. Les arsonoliposomes présentaient une activité antitrypanosomienne élevée contre Trypanosoma brucei et inhibent la croissance de certains types de cellules cancéreuses (HL-60, C6 et GH3).

La synthèse et l'évaluation d'une série de thiosemicarbazones en tant qu'inhibiteurs potentiels des protéases de cystéine pertinentes pour les maladies parasitaires sont signalées. Des dérivés de thiosemicarbazone 1 se sont avérés être des inhibiteurs puissants de la cruzaine et de la rhodesaine, des protéases essentielles dans les cycles biologiques de Trypanosoma cruzi et de T. brucei rhodesiense, les organismes causant la maladie de Chagas et la maladie du sommeil. Cependant, la série entière n'a qu'une puissance modeste contre la falcipaine-2, une protéase essentielle pour Plasmodium falciparum, l'organisme causant le paludisme. Parmi les inhibiteurs actifs, plusieurs inhibaient fortement la prolifération des cultures de T. brucei. Toutefois, une activité modeste seulement a été observée dans l'inhibition de la prolifération de T. cruzi ou de P. falciparum.

Des liposomes sont introduits en tant que porteurs encapsulés pour des enzymes activant des promédicaments. La technique utilisée est décrite en détail. Les auteurs déclarent qu'avec ces vésicules ils ont introduit une nouvelle stratégie pour le traitement avec des promédicaments.

L'acéturate de diminazène est un agent contre la babésiose fréquemment utilisé. Il a été postulé que le diminazène peut induire une diminution de la tension artérielle et exacerber l'hypotension présentée par les chiens atteints de babésiose. La présente étude a été effectuée pour évaluer l'effet de l'acéturate de diminazène sur la tension artérielle de chiens sains. Six bergers allemands sains, âgés de 18 à 24 mois, pesant en moyenne 30,4±2,75 kg, ont été utilisés. La tension artérielle a été mesurée directement aux intervalles de temps suivants: -5, 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 90 et 120 minutes après un traitement avec l'acéturate de diminazène (4,2 mg/kg) administré par voie intramusculaire. Aucune différence statistique (P>0,05) n'a été trouvée dans la tension artérielle entre les intervalles de temps. Un accroissement du rythme cardiaque a été observé 5 minutes après l'administration de l'acéturate de diminazène mais aucun changement de la tension artérielle n'était évident. La présente étude a conclu que l'acéturate de diminazène dans sa formulation actuelle avec de l'antipyrine ne modifie pas la tension artérielle chez des chiens adultes sains.

La présente communication décrit la conception, la synthèse et l'évaluation d'une série de diaminoquinazolines 2,4 en tant qu'inhibiteurs de la réductase de dihydrofolate trypanosomienne et leishmanide. Les composés ont été conçus en générant une banque virtuelle de composés et en les verrouillant dans le site actif des enzymes. Après leur synthèse, ils se sont avérés être des inhibiteurs puissants et sélectifs de la réductase de dihydrofolate leishmanide. On a également trouvé que les composés avaient une activité puissante contre Trypanosoma brucei rhodesiense, un organise causant la trypanosomose africaine et également contre T. cruzi, l'organisme causant la maladie de Chagas. L'activité contre Leishmania donovani, un des organismes causant la leishmaniose, était significativement plus faible.

Seize alcaloïdes de l'ordre des Amaryllidaceae ont été isolés de bulbes de Crinum kirkii dont la noraugustamine et la 4a,N-dédihydronoraugustamine étaient jusqu'ici inconnues. Leurs structures et celles des alcaloïdes déjà connus ont été établies par analyse physique et spectroscopique. Une application des techniques de RMN en deux dimensions a été utilisée pour une caractérisation complète des alcaloïdes ainsi que celle de 3-O-acétylsanguinine. 1,2-diacétyllycorine et 3-O-acétylsanguinine présentaient une activité contre Trypanosoma brucei rhodesiense, le parasite associé à la maladie du sommeil. 3-O-acétylsanguinine présentait également une certaine activité contre Trypanosoma cruzi.

L'efficacité protectrice du chlorure d'isométamidium et de l'acéturate de diminazène contre des infections à Trypanosoma brucei, Trypanosoma congolense et Trypanosoma vivax chez des bovins exposés à une population de glossines supprimée a été évaluée dans le sud-est de l'Ouganda. Au total, 66 et 57 bovins infectés par des trypanosomes ont été traités respectivement avec du chlorure d'isométamidium et de l'acéturate de diminazène. Ils ont fait l'objet d'un suivi de 12 mois et ont été examinés toutes les quatre semaines ainsi que 177 animaux sans trypanosomes, non traités. Il n'y avait pas de différence statistique dans le délai moyen jusqu'à l'infection avec aucune des espèces de trypanosomes chez les animaux traités avec du chlorure d'isométamidium ou de l'acéturate de diminazène. Toutefois, le délai moyen jusqu'à une infection trypanosomienne était significativement plus long pour les animaux traités que pour les animaux témoins. Le délai moyen jusqu'à l'infection avec chacune des trois espèces de trypanosomes différait significativement, le délai moyen jusqu'à une infection à T. vivax étant le plus court, suivi par T. congolense, puis par T. brucei. L'efficacité protectrice de l'acéturate de diminazène était aussi bonne que celle du chlorure d'isométamidium; ce qui implique que des traitements curatifs contre la trypanosomose sont suffisants pour être combinés à la lutte antiglossinaire. Ces résultats indiquent que le chlorure d'isométamidium ou l'acéturate de diminazène ont conservé leur efficacité contre les infections trypanosomiennes dans le sud-est de l'Ouganda bien qu'ils aient été utilisés depuis de nombreuses années.

Un examen phytochimique de l'extrait dans de l'éthanol à 80 pour cent de l'écorce de la tige de Vismia orientalis (Guttiferae ou Clusiaceae), une plante utilisée dans la médecine traditionnelle en Tanzanie, a résulté en l'isolement et en la caractérisation spectroscopique de plusieurs composés, dont la vismione D qui présentait une large gamme d'activités antiprotozoaires y compris certaines contre Trypanosoma brucei rhodesiense. Cependant, le composé était également légèrement cytotoxique contre les cellules L6 humaines.

Chez les trypanosomatides (Trypanosoma et Leishmania), protozoaires responsables de graves maladies humaines dans les pays tropicaux et subtropicaux, le métabolisme central des hydrates de carbone incluant la glycolyse est compartementalisé dans des péroxisomes particuliers appelés les glycosomes. Une biogenèse appropriée de ces organelles et un isolement correct des enzymes glycolytiques sont essentiels pour ces parasites. La biogenèse des glycosomes chez les trypanosomatides et celle des péroxisomes chez d'autres eucaryotes, y compris l'hôte humain, a lieu par le biais de processus homologues impliquant des protéines appelées les péroxines, qui exercent leur fonction au moyen d'interactions passagères multiples entre elles. Une expression réduite des péroxines entraîne la mort des trypanosomes. Les peroxines présentent seulement un faible niveau de conservation de la séquence. Par conséquent, il semble réalisable de concevoir des composés qui empêchent les interactions des protéines impliquées dans la biogenèse des glycosomes des trypanosomatides sans affecter la formation de péroxisomes dans les cellules de l'hôte humain. De tels composés seraient appropriés en tant que médicaments de premier plan contre les maladies causées par les trypanosomatides.

Nous avons examiné si l'administration d'héparine influence la prolifération in vivo des trypanosomes chez des rats infectés. Une administration d'héparine toutes les 8 heures par cathéter cardiaque inhibait la croissance de Trypanosoma brucei gambiense et prolongeait la survie des rats traités. L'administration d'héparine accroissait l'activité de lipase des lipoprotéines, la concentration des lipoprotéines à densité élevée dans le sang (HDL) et la teneur en ARN messager de l'haptoglobine du foie. La présence d'héparine dans le milieu de culture n'affectait pas directement la prolifération des trypanosomes in vitro. Cependant, l'ajout de plasma provenant de rats infectés traités avec de l'héparine au milieu de culture diminuait le nombre de trypanosomes. Cet effet était réduit lorsqu'on incubait les trypanosomes avec de l'alcool benzoïque, un inhibiteur connu de l'endocytose de la lipoprotéine facilitée par un récepteur. Ces données suggéraient que l'administration d'héparine réduisait le nombre de trypanosomes chez les rats infectés. Le facteur lytique des trypanosomes, une HDL et une protéine apparentée à l'haptoglobine, protège les humains et certains animaux contre une infection à Trypanosoma brucei brucei. Chez les rats, un accroissement des HDL et de l'haptoglobine peut affecter la prolifération de T. b. gambiense.

L'effet cytogénétique du bérénil a été évalué à trois concentrations (0,25; 0,5 et 1 mg ml^-1) sur des cultures de lymphocytes de buffles de rivière in vitro. La formation d'aberrations chromosomiques, le déclenchement d'échanges chromatides frères et la mesure de la formation des micronucleus ont été les paramètres cytogénétiques utilisés dans l'étude. Les résultats ont indiqué que le nombre de cellules présentant différents types d'aberrations chromosomiques structurelles, y compris des ruptures, des écarts, des effacements, des fragments et des fusions centriques, s'accroissaient de façon significative avec les trois doses de bérénil par rapport au témoin. Nous concluons que les trois paramètres cytogénétiques utilisés pour évaluer l'effet de l'acéturate de diminazène (bérénil) indiquent que ce médicament a un effet mutagène sur les cultures de lymphocytes des buffles de rivière.

Le fractionnement de l'extrait de Psorothamnus polydenius dans du méthanol a conduit à l'identification d'un certain nombre de composés dont l'activité antiprotozoaire in vitro contre Leishmania donovani et Trypanosoma brucei a été testée. Les chalcones 1 and 2 et le dalrubone présentaient des propriétés leishmanicides et trypanocides.

Les formes sanguines de Trypanosoma brucei sont dépourvues de cytochromes et sont, par conséquent, insensibles au cyanure. L'azide est un anion toxique qui comporte des propriétés chimiques et biologiques en commun avec le cyanure et qui peut agir de façon similaire en inhibant l'oxydase de cytochrome c. Il a donc été surprenant de trouver que les formes sanguines de T. brucei étaient sensibles à l'azide de sodium; la croissance a été réduite de 50 pour cent avec 0,1 mM d'azide de sodium. Jusqu'à présent, le seul enzyme connu dans les formes sanguines de T. brucei pour sa sensibilité à l'azide est la dismutase de superoxyde contenant du fer. Cependant, comme l'activité de la dismutase de superoxyde n'était pas affectée chez les parasites incubés pendant 16 h avec 0,5 mM d'azide de sodium (une concentration à laquelle il n'y a pas de prolifération de cellules), l'action toxique de l'azide ne peut pas être due à l'inhibition de cet enzyme. Ces résultats indiquent que la toxicité générale de l'azide est différente de celle du cyanure.

Les effets de l'acéturate de diminazène et du disodium de ceftriaxone sur la qualité du sperme de bêliers ont été évalués. Des injections intramusculaires quotidiennes de diminazène (6 mg/kg) ou de ceftriaxone (28,5 mg/kg) ont été administrées à chacun des sept bêliers Akkaraman répartis par médicament pendant deux jours. Des échantillons de sperme des bêliers ont été prélevés 1, 4, 24, 48, 72, 144, 288 et 336 h après le traitement et les caractéristiques du sperme ainsi que l'activité d'hyaluronidase ont été examinées. Les résultats ont montré que l'utilisation de ceftriaxone et du diminazène entraînaient des diminutions significatives (P<0,01) de la concentration, du volume et de la motilité des spermatozoïdes par rapport au groupe témoin au bout de 288 h après le traitement. En outre, l'activité d'hyaluronidase augmentait significativement (P<0,01) dans le sperme des bêliers traités avec du ceftriaxone alors qu'il restait inchangé chez ceux qui recevaient du diminazène. En conclusion, l'acéturate de diminazène et le disodium de ceftriaxone n'avaient pas d'effet nuisible sur l'hyaluronidase. Toutefois, les deux médicaments causaient une déficience du sperme chez les bêliers pendant les 288 h.

Au total, 58 extraits de polarité différente ont été préparés à partir de divers organes de 16 espèces de plantes turques et leurs activités antitrypanosomiennes, antileishmaniales et antiplasmodiales ont été testées. Aucune activité significative n'a été observée contre Trypanosoma cruzi alors que de nombreux extraits présentaient un potentiel trypanocide appréciable contre T. brucei rhodesiense, la portion soluble de Phlomis kurdica dans du CHCl₃ étant la plus active.

L'effet d'un anticorps à l'antigène de ganglioside sur les parasites Trypanosoma brucei a été examiné in vitro et in vivo en utilisant un anticorps monoclonal au ganglioside GM1 (AGM-1). L'anticorps présentait une cytotoxicité dépendant du complément contre T. brucei avec le complément de souris. En outre, les souris recevant l'AGM-1 ont été exposées à T. brucei par voie intrapéritonéale. Bien que toutes les souris témoins non traitées meurent dans les six jours suivant l'infection, toutes les souris injectées avec l'AGM-1 survivaient six jours après l'infection. Ces données suggèrent que l'anticorps à l'antigène de ganglioside sur T. brucei présente un potentiel de protection contre une infection à T. brucei.

Des antigènes de gangliosides associés aux liposomes (ganglioside GM1 ou gangliosides du cerveau de bovin) ont été préparés pour évaluer l'efficacité protectrice potentielle contre Trypanosoma brucei. Les souris ont été immunisées avec un ganglioside GM1 associé aux liposomes ou avec des gangliosides de cerveau de bovin par voie intrapéritonéale. Après l'immunisation, un nombre significativement plus élevé d'anticorps IgG et IgM spécifiques à l'antigène a été détecté dans leur sérum que dans le groupe témoin non immunisé. Lorsque le sérum des souris immunisée a été analysé pour la répartition des isotypes, les réactions des anticorps IgG1, IgG2a et IgG3 spécifiques aux antigènes ont également été notées. Après l'immunisation, les souris ont été exposées par voie intrapéritonéale à 1 × 10² cellules de T. brucei. Soixante pour cent des souris immunisées avec le ganglioside GM1 associé aux liposomes survivaient à l'infection et toutes les souris immunisées avec des liposomes contenant des gangliosides du cerveau de bovin survivaient. Cependant, toutes les souris témoins mouraient au bout de sept jours après l'infection. Ces données démontrent que les liposomes contenant des antigènes de gangliosides ont une utilité potentielle pour induire une réponse immunitaire protectrice contre une infection à T. brucei et suggèrent la possibilité de la mise au point de vaccins qui pourraient être utilisés finalement pour prévenir la trypanosomose.

Le répertoire de médicaments pour lutter contre des maladies protozoaires comme le paludisme, la maladie de Chagas, la leishmaniose et la trypanosomose africaine est terriblement inadéquat. Actuellement, le séquençage du génome et les projects de génomique structurelle sont en train d'élucider rapidement de nouvelles cibles pour les médicaments, fournissant des occasions incroyables pour les chimistes des médicaments. Nous illustrons ici la puissance de la conception d'un médicament fondée sur une structure dans ce processus par nos efforts visant à bloquer sélectivement la glycolyse des trypanosomes.

Le chlorure d'isométamidium a été utilisé pour lutter contre la trypanosomose animale depuis plus de 36 ans mais des échecs de la prophylaxie ont été signalés récemment dans des conditions naturelles. Dans la présente étude, nous avons étudié l'utilisation du médicament à des fins prophylactiques contre la trypanosomose chez les petits ruminants. Quarante-deux ovins et 44 caprins ont été répartis en quatre groupes de traitement. Les groupes 1 et 2 ont été traités avec du chlorure d'isométamidium (Samorine) à des intervalles de 3 mois alors que les groupes 3 et 4 servaient de témoins. Tous les animaux ont subi une exposition glossinaire naturelle et les niveaux d'isométamidium dans le sérum ainsi que les anticorps aux trypanosomes ont fait l'objet d'une surveillance. Sept jours après l'administration du médicament, les niveaux d'isométamidium étaient significativement plus élevés chez les caprins (13,7 ± 0,07 ng/ml) que chez les ovins (6,2 ± 0,06 ng/ml). Cependant la demi-vie d'élimination chez les ovins était de 14,2 ± 0,92 jours et était significativement plus élevée (P>0,05) que celle des caprins (12 ± 0,5 jours). La présente étude a établi que le métabolisme de l'isométamidium diffère entre les ovins et les caprins et cette différence peut avoir des implications importantes dans les zones d'exposition glossinaire élevée.

La chimiorésistance des trypanosomes est actuellement un problème mais ses mécanismes sous-jacents ne sont pas pleinement compris. On pense que l'absorption cellulaire des principaux médicaments trypanocides a lieu par le biais d'un transporteur d'adénosine. Le gène du transporteur d'adénosine 1, TbAT1, codant un transporteur de nucléoside de type P2 a été auparavant cloné à partir de Trypanosoma brucei brucei et lorsqu'exprimé dans la levure, il a présenté une spécificité aux substrats très similaire au transporteur de nucléoside P2 mais il ne pouvait pas transporter les diamidines (pentamidine et diminazène). Nous avons cloné et séquencé un gène similaire (TevAT1) provenant de Trypanosoma evansi et trouvé qu'il était identique à 99,7 pour cent au gène TbAT1. Afin d'élucider le rôle du gène TevAT1 sur l'effet trypanocide de la diamidine, nous avons manipulé génétiquement T. evansi pour une élimination conditionnelle du gène TevAT1 par interférence de l'ARN (ARNi). L'induction de l'ARNi résultait en une diminution par 10 du mARN de TevAT1, avec une résistance concomitante significative à l'acéturate de diminazène (bérénil). Les parasites induits se propageaient normalement et atteignaient un pic de densité cellulaire avec une concentration de bérénil in vitro 5,5 fois plus élevée que l'IC₁₀₀ du type sauvage. L'élimination de TevAT1 n'avait aucun effet sur l'activité trypanocide de la suramine et de l'antrycide mais conférait une certaine résistance à la samorine. Nos résultats valident la pertinence du gène du transporteur d'adénosine 1, TevAT1, dans la facilitation de l'effet trypanocide des diamidines chez T. evansi. En outre, nous démontrons pour la première fois que la déconnexion du gène d'ARNi chez T. evansi peut être induite en utilisant des plasmides conçus pour T. brucei. Nous démontrons également l'utilité d'une ACP en temps réel pour quantifier rapidement les niveaux de mARN dans les trypanosomes.