Este departamento cumple con unas observaciones rutinarias de las larvas para la determinación de enfermedades pero su meta inicial de control bacteriológico del medio se habia abandonado.
Es fundamental proseguir las dos funciones señaladas.
La numeración de la flora bacteriana total y vibrionacae, el seguimiento de las diferentes cepas observadas y la realización de antibiogramas son los trabajos básicos de bacteriología. La acumulación de datos permite un buen conocimiento de la evolución de la flora bacteriana en el medio y a partir de estos datos-referencias, los controles sistemáticos ayudan a enfocar la aparición de problemas en cría larval o el ensuciamiento de zonas o aguas normalmente limpias.
La sala de bacteriología cuenta con un material de muy buena calidad y abundante, microscopio, lupa de conteo de bacterias, pHmetro, autoclave, incubadoras, una sala independiente de siembra con lámparas U.V. Cuatro técnicos superiores se comparten el trabajo durante la semana (¿ Nadie el fin de semana ?).
Se reunían todas las condiciones para iniciar un buen control bacteriológico, sin embargo la sala se encontró sucia e inutilizada a la llegada del experto ; se puede añadir que la falta tanto de medios adecuados como de algunos productos para poder llevar a cabo este control complica seriamente el trabajo.
El estudio de las poblaciones bacterianas empezó con un medio general agar-nutrientes, las AQUAPLAK y antibiogramas.
Se entregó al personal hojas técnicas detalladas sobre la metodología, la utilización de las AQUAPLAK y la lectura de antibiogramas.
Agar nutrientes 2 % NaCl: medio para bacterias totales, único medio disponible en el centro (producto OXOID). A pesar de no constituir un medio adecuado se utilizó durante la asesoria para empezar el trabajo y perfeccionar las técnicas bacteriológicas.
Los medios Zobell y TCBS adecuados para el estudio de las bacterias marinas no se pudieron preparar en el centro por falta de varios componentes. Se les debería conseguir lo más pronto posible para disponer de los 2 medios indispensables al trabajo.
Mueller-Hinton : una pequeña cantidad de este medio permitió la preparación de unos antibiogramas.
Estas placas (SANOFI) listas para el empleo, fueron llevadas al centro en cantidad restringida por la precedente misión de asesoría, ellas permiten una estimación rápida de la flora bacteriana total y de los gérmenes de tipo Vibrio. Este material nuevo constituye un accesorio de trabajo muy satisfactorio que permite un seguimiento diario de los tanques de cría larval. Lectura de las Aqua-Plak en 24 horas máximo.
La realización de antibiogramas frecuentes nos proporciona los datos indispensables para el uso de los antibióticos en el centro de desove. Con una antibioterapia preventiva en cría larval, los antibiogramas determinan el tiempo de eficacia de los antibióticos.
Ver cuadro No 2 con los resultados detallados.
• Las diluciones apropiadas para los muestreos sobre el agua son :
En cajas de Petri con agar-nutrientes - 0,1 ml de la muestra :
Sin dilución para muestreos de algas interiores.
Con dilución 10 para muestreos de redes de agua, cisternas.
Con dilución 100 para muestreos de larvas, algas exteriores
Con dilución 1000 para muestreos de progenitores, artemia.
RESULTADOS DEL TRABAJO DE BACTERIOLOGIA DURANTE LA ASESORIA
CUADRO No 2
| MUESTREOS | NUMERACIONES DE COLONIAS BACTERIANAS/ml | ||
|---|---|---|---|
| CAJAS PETRI CON AGAR - NUTRIENTES | AQUA-PLAK | ||
| Bacterias total/ml | Vibrio/ml | ||
| Aerosoles : nave desinfectada | 0 col - exposición de 1/2 hora | ||
| nave en función | 26 col - exposición de 1/2 hora | ||
| Tanques de cría larval : | |||
| N5Z1 | 150 C/ml | ||
| Z1 | 2000 C | ||
| Z2 | 500<vibrio<5 000 | ||
| Z3 | 400 C + 200 T + 8000 A | 5 000<b<50 000 | 500<v<5 000 |
| M2 | 5 000<b<50 000 | 5 000<v<50 000 | |
| M3 | 45 000 C + 35 000 N | 50 000<b<500 000 | 50 000<v<500 000 |
| Algas : | |||
| Chaeto 5L | 3 000 B | 50 b/ml | no vibrio |
| Chaeto exterior | 10 000 C | 500 b/ml | no vibrio |
| Tanque : | |||
| Progenitores | 160 000 CA | 50 000 <b< 500 000 | 50 000<v<500 000 |
| Eclosión | 15 000 C antes // 3 000 C después de la | 50<b<500 | 50<v<500 (después de |
| limpieza | limpieza) | ||
| Artemia | 160 000 C + 53 000 N + 2 000 A | 500 000<b<5 000 000 | 500 000<v<5 000 000 |
| Agua : | |||
| Filtrada por UV | 160 CA | 50 b/ml | no vibrio |
| De cisterna cartuchos | 1 500 C | 500<b<5 000 | no vibrio |
| De cisterna arena | 1 000 C + 1 000 N | 500 <b<5 000 | no vibrio |
| De declorinador | 500 <b<5 000 | no vibrio | |
Colonias observadas : C puntos crema ;
T transparente ;
A amarillos ;
B blancos
CA amarillenta ;
R rojas ;
N colonias en nubes blancas.
En Aqua-Plak - 0,02 ml de la muestra :
Sin dilución para muestreos de algas interiores, redes
Con dilución 10 para muestreos de cisternas, larvas, altas exteriores.
Con dilución 100 para muestreos de progenitores, artemia.
• Generalmente existe una buena correlación entre la lectura del Aquaplak y de las cajas (Ver Cuadro 2) :
Cría larval : aumento progresivo de la cantidad de bacterias totales y de los Vibrio con la edad de la cría.
Algas : conteo bajo en Aquaplak y ausencia de Vibrio.
Cisternas : el agua aparece limpia con bacterias totales inferiores a 5000/ml y poco Vibrio (< 50/ml).
Agua pasada par UV : agua muy limpia.
Progenitores : flora total y Vibrio elevados.
Eclosión : se nota una diferencia, entre antes de las limpiezas (15000 col/ml) y el sistema de limpieza diaria que se utiliza actualmente (3000 col/ml - 500 Vibrio/ml).
Artemia : cantidad de bacteria muy alta, eso enfoca la necesidad de un enjuague más eficiente de las artemia antes de distribuirlas a las crías.
El control bacteriológico de esos medios permite determinar :
las zonas muy sucias : progenitores-artemia.
las zonas que se ensucian : eclosión en ausencia de limpieza, la cría larval con el tiempo y la edad de las larvas.
las zonas limpias : agua UV, algas, cisternas.
• Hasta el momento se han identificado 7 colonias diferentes por el color o el aspecto general (Ver cuadro 2). Una persona, de preferencia la misma (criterio subjetivo) debe seguir esta identificación de colonias presentes en el medio, sobre todo en TCBS, y observar su evolución.
• La lectura de antibiogramas realizada sobre las diferentes colonias observadas en el agua de tanques de maduración, eclosión y larvas mostró :
una resistencia total a la eritromicina, en eclosión.
una resistencia a la eritromicina, de las colonias más presentes en maduración y cría larval (colonias N,C, A,T).
sensibilidad al efecto del cloranfenicol, de todas las colonias observadas.
Estos resultados prueban el peligro del uso diario de antibióticos sin control. En efecto, en el centro se practican dos tratamientos de 1 ppm de eritromicina todos los días sobre los animales en tanques de desove (los adultos reciben el tratamiento que no les está destinado) y sobre los nauplii en tanques de eclosión.
En tales condiciones el uso de la eritromicina es inútil y se debe seguir los antibiogramas de rutina para informarse si esta resistencia persiste, ahora que las salas de eclosión y desove se limpian con cloro todos los días.
Lógicamente la resistencia a la eritromicina se propagó a la cría larval : en consecuencia, en este departamento la eritromicina no sirve, por las razones anteriores se aconseja no utilizar nunca el cloranfenicol en otro lugar que no sea la cría larval.
Es necesario un trabajo de rutina en bacteriología :
Numeraciones : 2 veces por semana : cisternas, redes de agua, tanques de cría larval, artemia, eclosión.
1 vez cada 15 días : maduración, desove, algas
Antibiogramas; 1 vez por semana : larvas, eclosión, agua filtrada por cartuchos.
1 vez por mes : maduración, artemia.
Aparte de este control de rutina, en caso de un problema patológico se toma inmediatamente una muestra para la siembra. Por eso unas cajas de Petri (medio para numeración y antibiograma) deben estar siempre listas para el uso ; también el Aquaplak da una respuesta rápida y su preparación no toma tiempo.
Hasta ahora se trabajó únicamente sobre el agua, sería también importante sembrar en rutina larvas trituradas.
Los análisis de los resultados bacteriológicos no sufren retraso, de las conclusiones de estos trabajos depende la gestión sanitaria del centro.
IMPORTANTE : la manipulación de los antibióticos requiere mucho cuidado porque son productos peligrosos para la salud.
